木薯钙调蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

欧文军，余厚美，安飞飞，罗秀芹，秦于玲，陈松笔(中国热带农业科学院 热带作物品种资源研究所/农业部木薯种质资源保护与利用重点实验室，海南儋州 571737)

木薯钙调蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

欧文军，余厚美，安飞飞，罗秀芹，秦于玲，陈松笔
(中国热带农业科学院 热带作物品种资源研究所/农业部木薯种质资源保护与利用重点实验室，海南儋州 571737)

钙调蛋白(CaM)作为重要的抗逆信号转导蛋白，在调控木薯抗逆境和块根采后生理腐烂中起重要作用，为给快速检测木薯在不同生长环境中CaM蛋白的表达水平提供优良抗体，克隆木薯CaM基因并将目的基因插入原核表达载体，经Escherichiacoli表达并纯化，用纯化的融合蛋白ACP-CaM免疫Balb/C小鼠，间接ELISA测定小鼠血清效价后，取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合，筛选能产生抗CaM单克隆抗体的杂交瘤细胞株，用Western blot、ELISA等方法对制备的单克隆抗体进行初步鉴定。Western blot分析结果显示原核表达重组质粒在E.coli中能高效表达CaM，免疫小鼠后取效价高的2#小鼠脾细胞和SP2/0细胞融合，共获得7株效价均达到106以上、能稳定分泌抗CaM抗体的细胞株，这7 株单抗与淀粉磷酸化酶、His、BSA均无交叉反应，4D5株与标签蛋白ACP有交叉反应，表明其余6株均为CaM特异性抗体；抗体亚型鉴定结果显示7株单抗均为IgG型抗体。

木薯；钙调蛋白；原核表达；单克隆抗体

木薯(ManihotesculantaCrantz)是世界三大薯类作物之一，也是世界六大农作物之一，是全球超过8亿人的基本食粮。但木薯块根采后2～3 d就快速腐烂，限制木薯的使用并导致严重的经济损失[1-3]。……