饲料中沙门氏菌的测定方法

岳良伟

摘要：饲料沙门氏菌的测定原理、测定方法，并用此法测定饲料原料、饲料产品中沙门氏菌，对测定结果进行分析。

关键词：饲料 沙门氏菌

中图分类号：S816

1.原理

目前饲料安全检测中对饲料中有害微生物的控制主要是监测饲料中沙门氏菌。样品中可能存在少量的沙门氏菌但却含有大量肠杆菌科的其他菌，因此选择性增菌是必须的，而且为了激活受伤的沙门氏菌，常进行预增菌。增菌使沙门氏菌抗原浓度增加，更有利于检验结果的呈现。

沙门氏菌快速检测试剂盒是专门用来检测饲料中沙门氏菌抗原的。沙门氏菌特异性抗体是快速定性检测的基础，经过增菌（选用营养肉汤进行预增菌，使“致傷”、冷冻的沙门氏菌复苏）和选择性增菌（使用选择性培养基RV进行增菌，使沙门氏菌大量繁殖，同时抑制其它杂菌生长）的阳性样品与染色剂标记的抗体结合形成抗原-抗体复合物，其沿着膜移动，被固定的抗体将使复合物着色，在样品区（S区）形成一条色带。内置质控色带（C区）是为了确认实验是否进行的正确。

2.检验方法

（1）仪器设备

小型粉碎机

电子天平（0.01g）

无菌瓶或无菌袋

沙门氏菌快速检测试剂盒

沙门氏菌增菌培养基 （BP）

沙门氏菌选择性增菌培养基（RV）

细菌培养箱

超纯水器

200?L的移液器

200?L的吸头

高压灭菌锅

水浴锅 36℃±1℃

量筒

（2）化学试剂与溶液配制

A、沙门氏菌增菌培养基（BP）的制备：

称取20g缓冲蛋白胨水于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，定量分装， 121℃高压灭菌15分钟。

B、沙门氏菌选择性增菌培养基（RV）的制备：

称取20g亚硒酸盐胱氨酸于1L灭菌水中，加热煮沸至完全溶解，定量分装。该培养基在配制当日使用。

（3）测定方法

A、采样：采集具有代表性的饲料样品，至少2kg，四分法缩分至250g，用小型粉碎机磨碎，过40目筛，装入密闭容器中，低温保存备用。

B、样品质量与沙门氏菌增菌培养基（BP）体积按1：9比例混合，例如，10g饲料样品加入90mL沙门氏菌增菌培养基。

C、混合物（样品/BP）在36℃±1℃培养16～20小时。培养过程中无菌瓶或无菌袋的瓶口或袋口不要封死。

D、加入与BP体积相同并且预先加温至36℃±1℃的沙门氏菌选择性增菌培养基（RV）至上述培养混合物中，在36℃±1℃培养16～24小时。培养过程中无菌瓶或无菌袋的瓶口或袋口不要封死。

E、将经过增菌和选择性增菌后的培养混合物冷却至室温，用移液器移取120?L（约自由滴落5滴）培养混合物到沙门氏菌快速检测试剂盒的样品孔中。

沙门氏菌快速检测试剂盒

F、在10～15分钟内，不超过30分钟看结果。低阳性结果要延迟到15分钟，一些阳性结果30秒就可以得到，这主要取决于样品中抗原的浓度。

（4）结果

阴性结果：只在C区（质控区）出现色带，为阴性结果。

阳性结果：出现两条色带为阳性结果，一条出现在S区（样品区），一条出现在C区（质控区），在S区出现任何色带都认为是阳性结果，色带之间可以有深浅的差异。

无效结果：如果C区（质控区）没有色带出现，即使在S区（样品区）有，结果也是无效的；若S区（样品区）没有色带出现，重复往该试验中加入50?L样品混合物，并且等待4分钟，若还没有色带出现，该试验结果是无效的，需要更换检测盒重新检测；如果色带出现在30分钟之后，该试验也将不能做出鉴别，视为无效试验。

（5）注意事项

A、每一个检测都有质控步骤，即在每一个检测盒上有一个C区（质控区），只有正确的操作步骤和良好性能的检测盒才能是C区（质控区）出现色带。

B、为保障实验室人员安全，只有具备适当设备的实验室才能承担沙门氏菌检验，应小心处理所有培养材料的废弃物。endprint