热休克蛋白90、Bcl—2在卵巢上皮癌中的表达及意义

张春梅++袁贞明++田秀成++郑红艳++张红丽

摘要：目的 探討热休克蛋白90（Heat shock protein90，HSP90）、Bcl-2（B-cell lymphoma-2）在卵巢上皮癌组织中的表达及临床意义。方法 采用SP免疫组织化学法检测47例卵巢上皮癌组织中HSP90、Bcl-2的表达情况，以25例交界性卵巢上皮性肿瘤组织和13例良性卵巢上皮性肿瘤组织作对照，对结果进行综合分析。结果 在卵巢上皮癌组织中HSP90、Bcl-2的阳性表达比良性和交界性卵巢上皮性肿瘤组织中的表达显著增高；在卵巢上皮癌组织中HSP90、Bcl-2的阳性表达随卵巢上皮癌的FIGO临床分期升高，组织分化降低阳性表达增强，并与有无淋巴结转移密切相关；提示二者联合检测对卵巢上皮癌的发生、发展、评估预后及降低肿瘤耐药的发生有重要意义，有助于对患者治疗和预后的监测。结论 联合检测卵巢上皮癌中HSP90、Bcl-2的表达可以成为卵巢上皮癌的早期诊断，监测肿瘤耐药，指导免疫治疗和靶向治疗及判断预后可靠的实验室指标之一。

关键词：卵巢上皮癌；热休克蛋白 90；Bcl-2；免疫组织化学

中图分类号：R737.31 文献标识码：A 文章编号：1006-1959（2017）19-0045-03

Expression and Significance of Heat Shock Protein 90 and Bcl-2 in Epithelial Ovarian Cancer

ZHANG Chun-mei1，YUAN Zhen-ming1，TIAN Xiu-cheng2，ZHENG Hong-yan1，ZHANG Hong-li1

（1.Department of Obstetrics and Gynecology，Maternal and Child Health Hospital of Shouguang City，

Shouguang 262700，Shandong， China；

2.Center for Disease Control and Prevention，Shouguang 262700，Shandong，China）

Abstract：Objective To investigate the heat shock protein 90（Heat shock，Protein90，HSP90），Bcl-2（B-cell lymphoma-2）expression in epithelial ovarian carcinoma and its clinical significance.Methods The expressions of HSP90 and Bcl-2 in 47 cases of ovarian epithelial carcinoma were detected by SP immunohistochemical method.25 cases of borderline ovarian epithelial tumor and 13 cases of benign ovarian epithelial tumor were used as controls，the results were comprehensively analyzed.Results The positive expression of HSP90 and Bcl-2 in ovarian epithelial carcinoma was significantly higher than that in benign and borderline ovarian epithelial tumor tissues.The positive expression of HSP90 and Bcl-2 in ovarian epithelial carcinoma was associated with the increase of FIGO of ovarian epithelial carcinoma and the decrease of histological differentiation，and it was closely related to lymph node metastasis.Suggesting that the combination of the two detection of ovarian epithelial cancer in the occurrence， development，assessment of prognosis and reduce the occurrence of tumor resistance is important to help patients with treatment and prognosis of the monitoring.Conclusion The combined detection of HSP90 and Bcl-2 expression in ovarian epithelial carcinoma can be one of the early laboratory indicators of early diagnosis of ovarian epithelial carcinoma，monitoring tumor resistance，guiding immunotherapy and targeted therapy and judging prognosis.

Key words：Ovarian epithelial carcinoma；Heat shock protein 90；Bcl-2；Immunohistochemistryendprint

卵巢癌是女性生殖道肿瘤中最常见的三大恶性肿瘤之一，其死亡率居三位之首。其中90%的卵巢癌是体腔上皮来源的恶性肿瘤，具有起病隐匿，易转移，易复发等特点，70%的卵巢癌患者诊断时已是晚期。近年来卵巢上皮癌的发病率在世界范围内呈上升趋势，随着手术、放疗、化疗、生物及基因等综合方法的应用，5年生存率虽有较大提高，但晚期患者因存在耐药或不耐受化疗反应等问题疗效甚微，5年生存率仍在30%左右[1]。因此早期判断肿瘤组织的恶变倾向，恶性程度及转移危险性对指导临床治疗，改善预后和提高生存率具有重要作用。我院采用SP免疫组化法联合检测HSP90、Bcl-2在卵巢上皮癌组织中的表达情况，综合分析，以期对卵巢上皮癌的早期监测，指导免疫治疗和靶向治疗及评价预后有新的导向作用，为临床提供新的可靠的实验室依据。

1 材料与方法

1.1标本来源

收集2010年3月～2014年12月我院妇产科收治，经开腹或腹腔镜手术证实的卵巢肿瘤患者，其中卵巢上皮癌患者47例，平均年龄（51.84±10.68）岁；交界性卵巢上皮性肿瘤患者25例；良性卵巢上皮性肿瘤患者13例为研究对象。所有病例均经病理确诊。所采用的卵巢上皮癌组织术前均无放、化疗史。

组织标本：选用患者对应的卵巢肿瘤组织，10%福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，制成4 μm切片备用。

1.2方法

免疫组化采用ElivisionTMplus二步法：石蜡切片脱蜡，水化后磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗，过氧化物阻断剂封闭过氧化物酶活性，加一抗，室温孵育，加二抗，滴加DAB显色，苏木精复染，常规脱水，透明封固。HSP90、Bcl-2、CD34均为鼠抗人单克隆抗体，购于北京中山金桥生物技术有限公司。已知的卵巢上皮癌阳性片作阳性对照；以PBS代替一抗作阴性对照。

1.3结果判定

HSP90阳性信号为胞浆呈棕黄色颗粒；Bcl-2阳性信号为胞浆/胞膜呈棕黄色颗粒为准。根据Beeasley免疫组化评分方法，按阳性细胞所占百分比并参考着色强度判断分级：无明显阳性细胞为（-）；阳性细胞数<25%为（+）；25%-50%为（++），>50%为（+++）。

1.4统计学方法

采用SPSS18.0软件进行统计学分析，两组样本均数比较采用非参数检验（Mann-Whitney法），两个样本率的比较采用？字2检验，两指标间相互关系采用Spearman相关分析，P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1在卵巢肿瘤组织中HSP90、CD34标记的MVD、Bcl-2的表达情况

由表1可见，卵巢上皮癌组与交界性、良性卵巢上皮性肿瘤组相比HSP90、Bcl-2表达的阳性率显著升高（均P<0.05）；二者高表达呈正相关。良性与交界性卵巢上皮性肿瘤两组间HSP90、Bcl-2表达的阳性率差异无统计学意义（P>0.05）。

2.2 HSP90、Bcl-2在卵巢上皮癌組织中的表达与各临床病理参数的关系

由表2可知年龄>50岁与年龄≤50岁的患者相比， HSP90表达的阳性率显著增高（H=2.124，P=0.034），有统计学意义（P<0.05） 。HSP90、 Bcl-2在各组织类型中无显著差异（均 P>0.05）；在组织分化和FIGO临床分期中 ，随组织分化降低，临床分期增高HSP90和 Bcl-2的表达逐渐增强（均P<0.05），有统计学意义。在有、无淋巴结转移中，HSP90和 Bcl-2阳性表达差异显著（均P<0.05），有统计学意义。

3 讨论

肿瘤的形成是由多种因素形成的，其中一个重要因素是由于肿瘤细胞的免疫原性低下，逃逸了机体的免疫监视。肿瘤细胞不断增殖，合成代谢增强，突变或异常蛋白质的存在刺激了HSP70的合成，需要大量HSP70来调节和稳定这一异常增殖过程，HSP90作为HSP70的辅分子伴侣依赖三磷酸腺苷（ATP）的作用参与多分子伴侣复合物的装配，还参与肿瘤血管的生长侵袭及转移。在肿瘤组织中突变的不正常的蛋白可刺激HSP90的合成，HSP90可通过构像的特异性与其他一些辅分子伴侣结合，形成各种不同的超级蛋白复合体，与HSP90的ATP酶循环相匹配，起调节作用。这些HSP90的受体蛋白包括跨膜酪氨酸激酶（原癌基因HER-2/neu蛋白，上皮生长因子受体、胰岛素样生长因子1受体）、蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）促分裂原活化蛋白激酶（Raf-1）原癌基因蛋白P53等，与细胞周期调节、细胞转化以及细胞存活和凋亡的信号转到通路有关，对保持肿瘤癌变过程中的多条关键信号转导通路的稳定性起着关键作用。HSP90可通过其受体蛋白多途径多环节影响肿瘤的发生、发展进程[2]。抑制HSP90的功能可导致其“客户”蛋白的降解，下调多种下游蛋白来调节多种细胞信号转导通路，从而达到对肿瘤的“多点攻击”，达到抑制肿瘤的生长、转移，HSP90已成为肿瘤治疗的新靶点[3]。

在本研究中HSP90 在良性和交界性卵巢上皮性肿瘤组织中有少量表达，在卵巢上皮癌组织中呈高表达。在卵巢上皮癌组织和交界性卵巢上皮性肿瘤组织中表达差异显著，与HSP90在正常细胞中处于静默态，在肿瘤细胞中处于活化态的特性相一致[3]，说明HSP90具有促进卵巢上皮性肿瘤发生恶变的功能。在临床治疗中通过检测HSP90在卵巢上皮肿瘤组织中的表达活性，有效阻断三磷酸腺苷（ATP）/二磷酸腺苷（ADP）结合位点，即格尔德霉素（GA）特异性结合的靶点，对抑制卵巢上皮性肿瘤的发生、发展具有重要意义。在年龄方面HSP90的阳性表达存在显著差异，说明年龄可导致HSP90与肿瘤细胞中的突变蛋白因子结合的程度增高，促进肿瘤的生长，预示预后不良。HSP90可作为某些抗癌药的分子伴侣促进药物进入细胞，发挥选择性抗癌活性，有效抑制了与其下游靶基因启动子的结合，与治疗密切相关[2]。在组织分化、临床分级、淋巴结转移方面均存在显著差异，说明HSP90在卵巢上皮癌组织中的高表达与卵巢上皮癌的组织分化程度，淋巴结转移有不同程度的相关，可能参与了肿瘤的肿瘤组织内的形成、肿瘤存活和侵袭转移。肿瘤组织内的HSP90通常和一些蛋白组成有活性的多伴侣复合物，三磷酸腺苷（ATP）的活性比正常组织内HSP90高，使HSP90抑制剂具有一定的靶向性，可用于肿瘤及转移灶的定位诊断，提高肿瘤细胞对其他化疗药物的敏感性[3]。endprint

卵巢上皮癌的发生发展过程中存在着癌基因的激活、抑癌基因的失活、凋亡调控基因的失调等各种异常表达情况[6]。Bcl-2作为具有抑制凋亡作用的基因，可以定位于不同细胞的线粒体、内质网及核膜上，组织线粒体细胞色素C的释放，从而发挥抗凋亡作用[4]。其过度表达可抑制细胞凋亡，促进细胞生存，从而延长细胞寿命，引起细胞异常积累，导致肿瘤的发生。Bcl-2的过表达可使肿瘤细胞对化疗药物不敏感，是一些肿瘤细胞产生耐药的机制之一，可诱导卵巢上皮性肿瘤有抗铂类作用[5]。

本研究中Bcl-2在良性、交界性卵场上皮性组织及卵巢上皮癌组织中的表达依次增强，说明Bcl-2在卵巢上皮性肿瘤中的表达与肿瘤的恶性程度成相关。Bcl-2的过度表达会增加其他基因突变机会，并使突变基因聚集在细胞内，从而发挥其抗凋亡活性，使正常细胞向肿瘤细胞转变，从而促进肿瘤细胞的恶性增殖[6]。在细胞分化和临床分期方面，随着肿瘤细胞分化程度的增加Bcl-2基因的过度表达显著增强，中晚期的卵巢上皮癌组织中Bcl-2基因的高表达率明显高于早期。在淋巴结转移方面差异显著，说明Bcl-2基因的高表达与预后密切相关。Bcl-2在肿瘤的形成及肿瘤耐药的形成中起重要作用，细胞凋亡对肿瘤的生长起着负调控作用，是抗肿瘤的重要途径[8-10]。Bcl-2过度表达时肿瘤细胞对化疗剂不敏感，在一定浓度化疗剂作用下，肿瘤细胞不死或凋亡明显降低，可诱导卵巢癌细胞对铂类产生耐药，说明Bcl-2高表达抑制细胞凋亡而产生肿瘤细胞耐药[7]，从而导致化疗效果降低或失败，影响对患者的生存效价的评估。提示卵巢上皮癌组织中Bcl-2低表达可能提高癌组织对放化疗等诱导凋亡治疗的易感性，以Bcl-2基因为靶点，下调Bcl-2基因表达，可促进细胞凋亡，逆转耐药。

通過对HSP90、Bcl-2进行联合检测可以有效判断卵巢上皮癌发生演变过程，评价预后，提高化疗效果，有针对性地提供靶向治疗和生物治疗，降低肿瘤耐药的发生率，提高患者的生存率，可以作为一个新的实验室监测指标。

参考文献：

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编辑/成森endprint