缩胆囊素神经肽分子印迹膜的制备及荧光免疫分析应用

彭丽芳， 李 桦

(武汉大学化学与分子科学学院，湖北武汉 430072)

缩胆囊素(Cholecystokinin，CCK)是一类分布广泛且具有多种生理功能的多型性神经肽，通常以四肽CCK4、五肽CCK5和八肽CCK8形式存在于脑脊液中[1]。CCK神经肽对记忆、学习和睡眠等生理功能具有调控作用，与抑郁等精神类疾病也紧密相关[2 - 3]。目前报道的脑脊液及血液中CCK神经肽的定量分析主要基于放射性免疫法[4 - 5]，该方法灵敏度高，但需使用昂贵的抗体，且有交叉反应的缺点。因此，研究建立高效、经济、特异性强的CCK神经肽定量分析方法，对于阐明其含量与脑疾病之间的关系具有重要的理论价值和临床意义。

常规生物传感器以酶、抗体等生物分子为识别元件，由于蛋白质类抗体价格昂贵且热稳定性差，限制了这类生物传感器的广泛应用[6 - 7]。分子印迹技术是以目标分子为模板合成具有特异性识别能力的分子印迹聚合物(Molecularly Imprinted Polymer，MIP)，MIP不仅具有抗体的特异性识别能力，而且具有耐高温、抗酸碱及有机溶剂、制备成本低和可重复利用的优点。MIP技术已经逐步应用于传感[8 - 9]、免疫分析[10 - 11]和色谱分离[12]等领域。与小分子MIP相比，蛋白质MIP的合成制备更具挑战性，主要是因为蛋白质分子量大且聚合过程中构象多变。抗原决定簇法是以多肽或蛋白质中一个特异性的裸露短肽为模板分子，制备所得的MIP可用来特异性识别整个多肽或蛋白质，该技术已用于合成多种蛋白质MIP[13 - 14]。

本课题组曾用抗原决定簇法合成制备CCK-MIP整体柱，将其用于固相微萃取-液质联用(LC-MS)测定人脑脊液中CCK神经肽[15]。……