使用CRISPR/Cas9技术构建新型重组伪狂犬病毒疫苗的初步研究

于之清，童 武，郑 浩，李国新，高 飞，王 涛，梁 超，叶 超，武吉强，黄勤峰，童光志

（中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241）

使用CRISPR/Cas9技术构建新型重组伪狂犬病毒疫苗的初步研究

于之清，童 武，郑 浩，李国新，高 飞，王 涛，梁 超，叶 超，武吉强，黄勤峰，童光志

（中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241）

本研究使用CRISPR/Cas9基因编辑技术结合同源重组，以伪狂犬病毒经典疫苗株Bartha-K61为骨架，将其gB基因替换为伪狂犬病毒变异株JS-2012的gB基因，经噬斑纯化、PCR筛选鉴定，获得重组病毒rPRV-BJB。体外生物学特性分析结果显示，重组病毒株rPRV-BJB与疫苗株Bartha-K61具有相似的生长特性和噬斑形态，可作为新型重组伪狂犬病病毒疫苗候选株。

变异伪狂犬病毒；CRISPR/Cas9；重组病毒；gB基因

Abstract:In this study, we utilized the speci fi c CRISPR/Cas9 gene editing system combined with homologous recombination to replace the gB of Bartha-K61 strain with that of JS-2012 strain. After several rounds plaque purification and PCR-screening, the acquired recombinant virus was identified by sequencing and designated as rPRV-BJB. rPRV-BJB and Bartha-K61 showed similar biological characteristics in vitro, indicating that rPRV-BJB is a promising PRV vaccine candidate that can be performed in following protective ef fi cacy evaluation.

Key words:PRV variant; CRISPR/Cas9；recombinant virus；gB gene

伪狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）属于α疱疹病毒亚科（Alphaherpesvirinae），可感染不同年龄段的猪，以种猪繁殖障碍、育肥猪生长缓慢、哺乳仔猪高死亡率为特征。自2011年以来，我国许多Bartha-K61免疫猪场爆发伪狂犬病，造成巨大经济损失。国内多份研究表明，本次伪狂犬病爆发是由伪狂犬病毒变异株引起的，且变异毒株主要保护性抗原基因的核苷酸序列出现了多处变异[1,2]。研制新型伪狂犬病病毒疫苗株，控制变异伪狂犬病的流行成为当务之急。

PRV有11种囊膜糖蛋白，其中糖蛋白B（gB）[3-6]、糖蛋白C（gC）[7,8]和糖蛋白D（gD）[9]能够有效激发体内免疫保护反应，刺激机体产生中和抗体[10,11]。研究表明，gB能够有效激发体内体液免疫和细胞免疫，且能够针对PRV致死性攻击为易感动物提供有效免疫保护[5,12,13]。序列分析发现当前流行的伪狂犬病毒变异株JS-2012的gB基因与经典疫苗株Bartha-K61差异较大。……