miR-16在葡萄膜黑色素瘤细胞中的表达变化及其对细胞增殖的影响

王芳，余爱华

(武汉大学中南医院，武汉430000)

miR-16在葡萄膜黑色素瘤细胞中的表达变化及其对细胞增殖的影响

王芳，余爱华

(武汉大学中南医院，武汉430000)

目的观察miR-16在葡萄膜黑色素瘤细胞中的表达变化，及其对细胞增殖的影响。方法培养葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6.5及正常葡萄膜黑色素细胞系UM-U-95。采用实时定量PCR法检测SP6.5细胞、UM-U-95细胞中的miR-16。将SP6.5细胞分为miR-16组、对照组和miR-16抑制剂组。其中miR-16组转染miR-16 mimics，对照组转染scramble(阴性对照序列)，miR-16抑制剂组转染miR-16抑制剂。分别于转染24、48、72 h采用MTT法测算各组相对活细胞百分比；转染72 h后采用克隆形成实验测算克隆形成率；转染72h后，采用Western blotting法检测各组细胞中的成纤维细胞生长因子2(FGF2)蛋白。结果SP6.5细胞、UM-U-95细胞中miR-16相对表达量分别为0.22±0.02、1.0，SP6.5细胞中miR-16的相对表达量低于UM-U-95细胞(P<0.01)。转染后48、72 h miR-16组相对活细胞百分比低于对照组，miR-16抑制剂组相对活细胞百分比高于对照组(P均<0.05)。转染72 h后，miR-16组、对照组、miR-16抑制剂组克隆形成率分别为20.15%±2.53%、42.63%±4.42%、68.36%±6.25%，miR-16组克隆形成率低于对照组，miR-16抑制剂组克隆形成率高于对照组(P均<0.05)。miR-16组、对照组、miR-16抑制剂组细胞中FGF2蛋白相对表达量分别为0.27±0.02、1.0、5.64±0.58，miR-16组FGF2蛋白相对表达量低于对照组，miR-16抑制剂组FGF2蛋白相对表达量高于对照组(P均<0.05)。结论miR-16在葡萄膜黑色素瘤细胞中表达下调。miR-16过表达可抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、降低克隆形成率，抑制miR-16表达可增强葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖能力。miR-16对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖能力的影响可能与调节FGF2蛋白表达有关。

微小RNA16；葡萄膜黑色素瘤；细胞增殖；成纤维细胞生长因子2

葡萄膜黑色素瘤是成人常见的原发性眼内恶性肿瘤，起源于葡萄膜黑色素细胞，发病率为0.02%～0.06%，易发生转移[1]。据报道，葡萄膜黑色素瘤患者5年病死率为17%～50%。肿瘤常发生肝脏转移，一旦发生肝脏转移则预后极差，生存期仅2～7个月，仅13%的患者存活超过1年[2]。深入研究葡萄膜黑色素瘤的发病机制对提高该病诊治水平和新药研发具有重要意义。miRNA是一类非编码长链RNA，可在后转录水平下调靶基因的表达。miR-16被认为是一种抑癌基因[3]，其在多种肿瘤中异常表达[4,5]，并参与细胞增殖、凋亡等生物学过程。然而miR-16在葡萄膜黑色素瘤细胞中的表达变化及其对细胞增殖的影响尚未见报道。……