淡紫拟青霉致角膜溃疡1例并文献复习

王露霞，彭亮红，李建勋，李雪梅，黄晓燕

(广州军区广州总医院a.检验科，b.眼科，c.皮肤科，广州 510010)

淡紫拟青霉致角膜溃疡1例并文献复习

王露霞a，彭亮红b，李建勋a，李雪梅c，黄晓燕a

(广州军区广州总医院a.检验科，b.眼科，c.皮肤科，广州 510010)

淡紫拟青霉；真菌性角膜炎；真菌感染

淡紫拟青霉(Paecilomyceslilacinus)是土壤和植物中普遍存在的腐生菌，是实验室及医疗器械常见的污染菌之一,对人类是一种机会致病真菌。其感染常为医源性感染或外伤所致，尤其好发于免疫缺陷宿主。本文报道1例由淡紫拟青霉引起的角膜溃疡。

1 病历摘要

患者，女，66岁，于4年前在农田作业时用衣物擦拭右眼后即出现眼红、眼痛、畏光、流泪，伴视力下降，未予特殊处理。上述症状出现2周后在外院就诊，诊断为“感染性角膜炎”，予局部抗真菌、抗细菌治疗(具体不详)，刮取角膜分泌物涂片+培养，未发现细菌和真菌。患者自觉症状无好转，为求进一步诊治于2016年3月来我院就诊，门诊以“右眼角膜炎”收入眼科。患者主诉有高血压病史10年，否认糖尿病史、肝炎病史、病毒感染史，无免疫缺陷，否认外伤史。专科检查：右眼视力为0.2，眼压18.3；左眼视力为0.7，眼压12.8。右眼睑红肿(+)，结膜充血(++)，角膜混浊，表面呈溃疡面，有脓性分泌物。角膜病灶呈不同程度的白色苔垢样物覆盖，见图1。根据角膜刮片、培养和分子生物学结果,最终诊断为淡紫拟青霉菌引起的真菌性角膜溃疡。用克霉唑眼膏、那他霉素眼液、两性霉素B眼液滴右眼，营养角膜上皮药物对症治疗，治疗3周后患者症状好转，右眼视力恢复至0.5，结膜轻度充血，溃疡面明显缩小。刮取角膜分泌物镜检、真菌培养均阴性，予出院。出院后扔按上述方案治疗3个月，以巩固治疗防止复发,并返院复查，至今无复发。

图1 角膜病灶呈不同程度的白色苔垢样物覆盖

2 微生物检验

2.1角膜刮片镜检 角膜溃疡组织刮片革兰染色镜检可见分隔菌丝，见图2。

2.2真菌培养及镜下特征 角膜溃疡组织接种沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)和马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)置于27 ℃培养。该菌在27 ℃时SDA、PDA上生长迅速，第3天可见真菌菌落，菌落初为白色羊毛状，逐渐转为淡灰紫色，随着时间延长菌落变为暗灰紫红色，菌落颜色呈同心圆分布，培养5 d左右菌落背面呈黄色，10 d后背面为粉红色，见图3、4、5。传代培养置37 ℃时菌落生长缓慢，40 ℃时生长完全受抑制。小培养镜下形态：无色透明菌丝，帚状分生孢子梗，分生孢子梗直立，长约40～600 μm，宽3.0～4.0 μm，壁粗糙，黄色，梗基紧密成簇，上有2～4轮瓶梗，其顶端帚状枝一般单轮生，瓶梗基部膨大，顶端尖细，形成细长的产分生孢子管状小体(约1 μm)；分生孢子椭圆形或近球形，壁光滑或粗糙，长约2.5～3 μm，宽2.0～2.2 μm， 分生孢子链呈柱状或分散柱状。见图6。

图2 组织刮片革兰染色镜检见分隔菌丝(×1 000)

图3 SDA上生长4 d菌落颜色及形态

图4 SDA生长10 d左右菌落颜色

图5 SDA生长5 d左右菌落背面颜色

图6 小培养镜下形态(乳酸酚棉蓝染色，×1 000)

2.3DNA测序 经北京协和医院检验科对该菌株进行rRNA基因ITS扩增并测序，测序结果在GenBank核酸序列数据库中作BLAST比对，与基因库中编号FJ752603.1的淡紫拟青霉株的同源性为99%，与其他多株淡紫拟青霉的同源性也为99%，证实该菌株为淡紫拟青霉。

2.4体外药敏试验 用瑞典倍肯公司AB Biodisc生产的E-test试剂条对该菌株进行体外药敏试验。取5 d培养物，用0.1%吐温-20的生理盐水1 mL洗脱培养物，制成0.5麦氏浊度单位菌悬液，涂布于含有1.5% RPMI 1640琼脂平板，干燥15 min后放试剂条，27 ℃培养48 h判读最低抑菌浓度(MIC)结果：伊曲康唑MIC为32 μg/mL、伏立康唑0.19 μg/mL、两性霉素B 0.75 μg/mL、氟胞嘧啶32 μg/mL、氟康唑256 μg/mL。

3 讨论

淡紫拟青霉属半知菌纲、丝孢菌目、丝孢菌科、拟青霉属[1-2]。淡紫拟青霉对营养要求条件不高，可在多种培养基中生长，最适宜的培养基为PDA、SDA，培养时间以10 d左右为宜，温度和pH是影响淡紫拟青霉生长发育的重要因素。文献报道，淡紫拟青霉生长温度范围很宽，从8 ℃到38 ℃都可以生长，在15～30 ℃生长良好，最佳生长和产孢温度为25～30 ℃，6 ℃和40 ℃时停止生长，35 ℃时停止产孢；pH在2～12均能生长，产孢最佳pH为4～6[3]。

淡紫拟青霉引起的感染包括角膜炎、皮下及皮下组织感染、瓣膜修复导致心内膜炎、鼻窦炎、甲真菌病、AIDS患者感染[4-8]。淡紫拟青霉眼睛感染表现为角膜炎、内眼炎、角膜溃疡和眶肉芽肿等，诱发因素包括外伤史、眼部手术后及使用过期的隐形眼镜和在临床表现出角膜炎之前使用皮质类固醇[4]。本例患者自述无外伤史，可能与在农田作业时由淡紫拟青霉污染的衣物来擦拭右眼而引发角膜溃疡有关，其临床表现起病缓慢，亚急性经过，刺激症状较轻，伴视力障碍。据文献报道，两性霉素B、氟胞嘧啶、氟康唑对淡紫拟青霉的体外抗菌活性较低[9-11]，而伏立康唑具有较高的抗菌活性[4,12-13]。本例真菌体外药敏试验结果与文献相符。该患者未确诊淡紫拟青霉菌感染及无药敏试验结果时，临床先采用眼内通透性较好、刺激性小和抗真菌谱广的氟康唑滴眼液滴右眼，药敏结果提示该药耐药即停药。选择敏感有效的抗真菌药物早期治疗对患者的预后至关重要。因此，实验室的分离培养，准确鉴定及体外药敏试验对临床的治疗具有重要的指导意义。

致谢：感谢北京协和医院检验科细菌室的老师对淡紫拟青霉菌株分子生物学鉴定给予帮助！

[1]李芳，刘波，黄素芳. 淡紫拟青霉研究概况与展望[J]. 昆虫天敌，2004, 26(3):132-139.

[2]Samson RA.Paecilomycesand some allied hyphomycetes[J]. Stud Mycol, 1974, 6(1): 58-62.

[3]夏汉祥，廖美德，胡亮亮，等. 淡紫拟青霉的研究现状[J]. 世界农药，2010，32(5): 8-12.

[4]Turner LD, Conrad D. Retrospective case-series ofPaecilomyceslilacinusocular mycoses in Queensland, Australia[J]. BMC Res Notes, 2015, 8: 627.

[5]Wong G, Nash R, Barai K,etal.Paecilomyceslilacinuscausing debilitating sinusitis in an immunocompetent patient: a case report[J]. J Med Case Reports, 2012, 6: 86.

[6]Ding CH, Tzar MN, Rahman MM,etal.Paecilomyceslilacinusfungaemia in an AIDS patient: the importance of mycological diagnosis[J]. Pak J Med Sci, 2014, 30(4): 914-916.

[7]吕雪莲，陈晶，沈永年，等. 淡紫拟青霉所致皮肤及皮下感染：临床和实验研究[J]. 中国真菌学杂志，2006，1(3)：129-132.

[8]Evans JM, Wang AL, Elewski BE. Successful treatment ofPaecilomyceslilacinusonychomycosis with efinaconazole and tavaborole[J]. Skin Appendage Disord, 2015, 1(4): 169-171.

[9]Loot ME, Sheehan DJ, Davis LS.Paecilomyceslilacinusinfection with a sporotrichoid pattem in a renal transplant patient[J].J Drugs Dermatol,2007,6(4):436-439.

[10]Rimawi RH, Carter Y, Ware T,etal. Use of voriconazole for the treatment ofPaecilomyceslilacinuscutanecous infection: case presentation and review of published literature[J]. Mycopathologia, 2013, 175(3-4):345-349.

[11]Keshtkar-Jahromi M, McTighe AH, Segalman KA,etal. Unusual case of cutaneous and synovialPaecilomyceslilacinusinfecition of hand successfully treated with voriconazole and review of published literature[J]. Mycopathologia, 2012, 174(3): 255-258.

[12]Mondem Y, Sugita M, Yamakawa R,etal. Clinical experience treatingPaecilomyceslilacinuskeratitis in four patients[J]. Clin Ophthalmol, 2012, 6: 949-953.

[13]王鑫，张韡，沈永年，等. 口服特比萘芬联合5-氨基酮戊酸光动力治疗淡紫拟青霉皮肤感染一例[J].中国麻风皮肤病杂志，2017，33(5)：276-280.

2017-08-04)

(本文编辑：刘群)

10.13602/j.cnki.jcls.2017.10.19

王露霞，1960年生，女，副主任技师，大学本科，主要从事临床微生物检验工作。

R446.5

B