白芨繁殖技术研究

毛鑫　王锋　杨传桃

摘要：以名贵药材白芨[Bletilla striata （Thunb.） Reichb. f.]种子萌发的无菌苗作为外植体进行组织培养，建立了白芨快速繁殖技术体系。结果表明，白芨种子萌发率最高的培养基为MS+1.6 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA；诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L 2，4-D；丛生芽增殖效果最明显的培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA；0.5 mg/L GA3对白芨幼苗的生根作用最为明显，组培苗移栽以泥炭为基质时存活率和生长状况最佳。

关键词：白芨[Bletilla striata （Thunb.） Reichb.f.]；种子；无菌苗；增殖；快速繁殖

中图分类号：S567.23+9.1+2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）20-3898-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.20.026

Abstract： The sterile seedlings from seeds of Bletilla striata （Thunb.） Reichb. f. were used as explants for tissue culture and establish a rapid propagation technology system. As the study shows，the best culture medium for the sprouting of the B. striata is as follows：MS+1.6 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA；the best culture medium for the callus induction is as follows：MS+1.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L 2，4-D；the culture medium of the multiple shoots which has the most obvious propagation effect is as follows：MS+1.0 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA；0.5 mg/L GA3 has the most distinct rooting effects on the B. striata seeding，the peat soil transplating substrate of blettila organizational seedings is the best.

Key words： Bletilla striata （Thunb.） Reichb. f.； seed； sterile seedlings； proliferation； grapid production

白芨[Bletilla striata（Thunb.）Reichb.f.]又叫明白芨、紫兰根、甘根、白给，为兰科（Orchidaceae）白芨属（Bletilla Reichb.f.）多年生草本植物[1，2]。白芨块根为名贵药材，具有收敛止血、消腫生肌的功效，民间用于治疗外伤出血、烧伤烫伤、手足皲裂等[3]。白芨种子细小、种皮为单层细胞组成，胚不分化，无胚乳，在野生条件下很难萌发[4]。加上多年的过度采挖及环境的日益恶化，野生白芨的数量急剧减少。白芨目前已被列为国家珍稀濒危保护植物[5]。目前市场上白芨人工栽培主要依靠分株繁殖[6]，这种繁殖方式不仅周期长，技术不成熟，而且由于缺乏优良品种，很难满足白芨的市场需求[7-10]。因此，保护白芨资源、解决白芨繁殖困难的问题迫在眉睫。有关白芨的快速繁殖已有许多报道，袁宁等[11]发现，白芨组织培养受培养基影响较大，最适合萌发的培养基是MS基本培养基；张燕等[12]发现低浓度的6-BA、KT抑制白芨种子的萌发和生长；喻苏琴等[13]利用白芨种子进行无菌播种，比较了培养条件对白芨种子萌发的效应。本试验通过改变植物生长调节剂组合及其浓度配比，比较了植物生长调节剂对白芨种子萌发的影响，筛选丛生芽增殖培养和生根培养的最佳培养基，旨在为建立无性繁殖体系、实现白芨快速繁殖和工厂化生产提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料及处理

白芨种子及其无菌苗以及植物生长调节剂NAA、6-BA、2，4-D、GA3由生物资源保护与利用湖北省重点实验室提供；选取白芨种子作为外植体，流水冲洗2 h后用滤纸吸干水分，在超净工作台上用75%乙醇浸泡30 s左右，然后用0.1%的升汞振荡消毒3 min，去离子水清洗5次，再接种到培养基中。

1.2 基本培养条件

试验里基本培养基均为MS培养基，加蔗糖25 mg/L、琼脂6.5 mg/L、活性炭1 mg/L；培养室内的环境条件均为温度25～28 ℃，光照度1 800 lx，光照时间10 h/d。

1.3 培养方法

1.3.1 种子萌发培养基筛选 在MS基本培养基里添加不同浓度的NAA（0.1、0.2、0.3、0.4 mg/L）和6-BA（1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0 mg/L）两两组合，有24个处理，另设一空白对照（CK1），共25个处理，处理编号1～25，每个处理接种10瓶，将准备好的白芨种子随机选取10粒，用移液枪均匀地接种在含有不同植物生长调节剂组合的培养基上，培养条件为前述的基本培养条件。20 d后观察培养结果，以筛选出白芨种子萌发的最佳培养基。

1.3.2 愈伤组织诱导培养基筛选 切取白芨种子萌发的无菌苗茎段（约0.5 cm）作为外植体，接种至MS培养基中，添加不同浓度的6-BA（0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L）和2，4-D（0.5、1.0、1.5、20 mg/L）两两组合，有16个处理，另设一空白对照（CK2），共17个处理，处理编号26～42，每个处理接种10个外植体，10次重复，置于培养室中培养，培养条件同上，30 d后计算其诱导率。endprint

1.3.3 丛生芽增殖培养基筛选 将白芨的愈伤组织接种至MS培养基中，添加不同浓度的6-BA（0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L）和NAA（0.10、0.15、0.20 mg/L）两两组合，有12个处理，另设一空白对照（CK3），共13个处理，处理编号43～55，每个处理接种3个外植体，10次重复，置于培养室中培养，记录丛生芽的增殖情况，到60 d计算诱导率。

1.3.4 生根培养基筛选 剪取上述培养得到的单根芽，接种到MS培养基中，附加不同浓度的GA3（0、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mg/L），共6个处理，处理编号56～61，置于培养室中培养，培养条件同上，培养25 d后观察白芨丛生单根芽的生根状况，筛选适合白芨丛生单根芽生根的最佳培养基。

1.4 炼苗移栽

选取生长旺盛、叶片多且根系发达的白芨组培生根苗，打开瓶盖，放置在培养室中驯化3～5 d；然后小心取出生根苗，用流水洗净根部的培养基，移栽至分别由蛭石、珍珠岩、泥炭组成的栽培基质中，在植物培养室中培养30 d，培养温度25 ℃，光照度2 200 lx，光照时间15 h/d，观察并记录白芨组培生根苗在各栽培基质中的生长情况和存活率。

2 结果与分析

2.1 NAA和6-BA对白芨种子萌发的影响

植物生长调节剂NAA和6-BA对白芨种子萌发的影响情况见表1。从表1可知，不添加植物生长调节剂的处理其白芨种子萌发率很低，仅为7%；NAA与6-BA以一定浓度配比后，白芨种子才能取得较好的萌发效果；其中以NAA 0.3 mg/L+6-BA 1.6 mg/L组合的白芨种子萌发率最高，可达98%。

2.2 6-BA和2，4-D对白芨愈伤组织诱导的影响

植物生长调节剂6-BA和2，4-D对白芨种子萌发的无菌苗茎段愈伤组织诱导的影响情况见表2。从表2可知，添加不同浓度配比的6-BA和2，4-D培养基对白芨无菌苗茎段愈伤组织的诱导有不同的影响作用，其中6-BA浓度为1.0 mg/L、2，4-D浓度为1.5 mg/L时，诱导率最大，为67%，诱导效果相对最好。

2.3 NAA和6-BA对白芨愈伤组织丛生芽增殖的影响

植物生长调节剂NAA和6-BA对白芨愈伤组织丛生芽增殖的影响情况见表3。从表3可见，添加不同浓度配比的NAA和6-BA对白芨愈伤组织丛生芽增殖有不同的影响，其中6-BA浓度为1.0 mg/L、NAA浓度为0.15 mg/L时，增殖效果最明显，诱导率达96.7%。

2.4 GA3对白芨丛生单根芽生根的影响

植物生长调节剂GA3对白芨丛生单根芽生根的影响情况见表4。由表4可知，不添加任何植物生长调节剂时，白芨丛生单根芽长势差，添加适当低浓度的GA3可以促进白芨丛生单根芽生根，其中0.5 mg/L GA3处理的生根效果最明显，但GA3促进白芨生根的机制尚不清楚。关于GA3促进植物生根的情况也有报道，陈仕江等[14]发现适当浓度的GA3能促进金钗石斛（Dendrobium nobile Lindl.）的生根。刘世彪等[15]发现GA3可以提高火棘[Pyracantha fortuneana（Maxim.）Li]插条的生根率。

2.5 组培苗的移栽

用蛭石、珍珠岩、泥炭不同栽培基质种植白芨组培生根苗，比较各栽培基质对白芨组培生根苗存活和生长的影响，结果见表5。从表5可知，以泥炭作为基质移栽白芨组培生根苗的生长状况最好，存活率最高，达到96.7%，其原因可能是泥炭中富含豐富的有机质、有助于白芨组培生根苗的生长所致。

3 小结

试验选取从种子→无菌苗→愈伤组织→丛生芽诱导→单根芽诱导生根→炼苗移栽这一技术流程，建立了白芨快速繁殖体系，实现了白芨组织培养苗的快速大量繁殖。结果显示，白芨种子萌发的最佳培养基为MS+1.6 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA；愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L 2，4-D；丛生芽的增殖效果最明显培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA；0.5 mg/L的GA3对促进白芨丛生单根芽生根的作用最明显，白芨组培苗移栽的基质以泥炭最佳。

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