松树土壤根际微生物溶磷基因的克隆与表达

吴雪　金辉　唐健

摘要：探究土壤根際微生物溶磷基因对难溶性矿物质磷的溶解作用。利用从土壤中提取宏基因组，克隆了GabY基因，并构建了表达载体，研究了该基因在大肠杆菌DH5α的表达对难溶矿物质磷酸Ca3（PO4）2的溶解作用。结果表明，构建的GabY表达载体成功表达；对照组产酸能力较试验组弱，且对照组溶磷效率要低于试验组，直接从植物根际土壤微生物宏基因组中筛选溶磷基因对矿物质无机磷的溶解的研究可行。

关键词：根际微生物；溶磷；GabY基因

中图分类号：S714.3；S791；Q78 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）20-3952-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.20.039

Abstract： To study the dissolving function of GabY gene on mineral inorganic phosphorus. The macro genomic DNA from soil was extracted，GabY gene was cloned， and then integrated into expression vector pETDuet-1，induced the integrated vector expression in DH5α to research the dissolving function on Ca3（PO4）2. The results showed GabY gene expression was successfully induced，and was able to promote the dissolving efficiency of inorganic phosphorus. Directly selected the mineral inorganic phosphorus soluble gene from soil macro genomic DNA is a viable method.

Key words： rhizosphere microorganisms；soluble phosphorus；GabY gene

磷是植物生长所必需的一种矿物质元素，而土壤中能被植物直接吸收利用的磷的含量是很低的，绝大多数的磷是以难溶解的无机磷形式存在[1，2]，而磷肥的大量使用易对环境造成严重的污染。关于微生物对植物利用自然界中无机磷进行了大量研究，如Badu-Khan等[3]、Shahid等[4]、Anzuay等[5]在矿物质磷溶解基因（Mps+）方面都做过大量研究，其中包括GabY和PQQA、PQQB、PQQE等PQQ家族基因；国内也对此做了相关研究[6]。广西壮族自治区典型的桉树林喀斯特地貌以及马尾松红色土质蕴含着大量的矿物质无机磷，因此对广西桉树林土壤中溶磷微生物的研究有着很重要的意义。本研究以广西桉树林和马尾松根际土壤中宏基因组入手，研究宏基因组中的溶磷基因的溶磷效率，为马尾松林和桉树林土质改造提供了理论基础。

1 材料与方法

1.1 土壤来源

南宁本地马尾松林根际土壤和桉树林根际土壤混合体。

1.2 培养基及试剂