橡胶树PEPC基因的克隆、生物信息学和表达分析

王岳坤，阳江华，丁 丽，黄红海，桂红星

(中国热带农业科学院橡胶研究所∕农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室，海南 儋州571737)

橡胶树PEPC基因的克隆、生物信息学和表达分析

王岳坤，阳江华，丁 丽，黄红海，桂红星*

(中国热带农业科学院橡胶研究所∕农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室，海南 儋州571737)

【目的】克隆橡胶树磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因的全长cDNA，通过生物信息学和基因表达分析，为基因功能研究奠定基础。【方法】根据橡胶树PEPC基因片段序列设计引物，通过RACE获得cDNA全长，用DNAMAN软件预测编码多肽序列，用ProtParam工具分析多肽基本理化性质，用NCBI-Blast工具搜索同源的核酸及多肽序列，用ClustalX2.0软件比对不同植物来源的多肽序列，并用MEGA 6.06软件构建系统进化树，用Real-time RT-PCR分析基因表达模式。【结果】从橡胶树胶乳中克隆到一个新的PEPC基因的全长cDNA，其长度为3206 bp，包含一个2898 bp的开放读码框(ORF)，112 bp的 5’UTR和196 bp 的3’UTR。预测该基因编码965个氨基酸的多肽(HbPPC2)，其分子量为110.35 kDa，等电点为5.76；该基因的编码区核苷酸序列和其编码多肽氨基酸序列分别与早期克隆的橡胶树HbPPC1基因(KJ721228)的编码区和编码多肽序列有81.3 %和92.1 %的同源性。预测HbPPC2定位于细胞质，为不稳定蛋白，其活性受多种因素调控。预测HbPPC2酶活性中心是其第172位残基His，磷酸化位点是其第11位残基Ser，单泛素化位点是其第628位残基Lys。其第178、179、226和366位残基Arg在三维结构中靠近，构成葡萄糖-6-磷酸(G6P)的结合位点；其第450、641、753、767位残基Arg在三维结构中靠近，构成PEP的结合位点。HbPPC2基因在叶片、树皮、胶乳、雄花、雌花均有表达，在胶乳表达量最高；……