三七超临界CO2萃取物对谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用

段贤春，周 安，彭代银，鲍金云，夏伦祝

(安徽中医药大学1.药学院；2.第一附属医院药学部，安徽 合肥 230038)

脑缺血是致残和致死的主要原因之一，其发生概率随年龄的增长而增加[1]。研究表明，脑缺血缺氧后神经细胞的损伤与谷氨酸(glutamate, Glu) 介导的兴奋性毒性密切相关[2-3]。脑缺血缺氧后突触前膜会过度释放谷氨酸，突触间隙堆积的谷氨酸引起Ca2+大量内流，从而导致神经细胞损伤。α-氨基羟甲基异恶唑丙酸(amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic acid, AMPA)受体上的谷氨酸受体2(glutamate receptors 2,GluR2)亚基可以阻断Ca2+内流，绝大部分神经元突触表面的AMPA受体上含有GluR2亚基，对Ca2+的通透性很低[4-5]。研究表明，膜转运蛋白(protein that interacts with C kinase Ⅰ, PICK1)的PDZ结构域与GluR2 C末端紧密结合可以调节突触AMPA受体GluR2亚基的表达，进而影响到AMPA受体对Ca2+通透性[6]。

三七为五加科多年生草本植物三七Panaxnotoginseng(BurK.)F. H. Chen的干燥根，收录于《本草纲目》，具有活血化瘀、消肿止痛的作用[7]。三七总皂苷通过促进脑缺血/再灌注大鼠脑组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的表达来发挥神经保护作用[8]。除皂苷类成分外，课题组前期研究发现，三七超临界萃取物(supercritical fluid extract, SFE)主要含有人参炔醇、斯巴醇等脂溶性成分。三七中的脂溶性成分如人参炔醇对损伤的神经细胞也有保护作用[9]，但其脂溶性部位对损伤的神经细胞的保护作用机制尚不明确。故本实验采用谷氨酸损伤PC12细胞为体外缺血性脑损伤模型，研究三七SFE是否可以干扰或阻断PICK1与GluR2亚基的相互作用，为PICK1成为一个可能的药靶蛋白提供实验基础。

1 材料

1.1药物与试剂三七超临界CO2萃取物(实验室自制)；FSC231抑制剂(纯度>96.66%，美国Calbiochem公司，批号2769360)；L……