多房棘球蚴LDH基因的克隆表达及免疫原性研究

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·论著·

多房棘球蚴LDH基因的克隆表达及免疫原性研究

何顺伟1，李洪清2，李晓燕2，赵瑞雪2，魏晓星1

目的克隆表达青海省多房棘球蚴(Echinococcusmultilocularis, Em)乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase, LDH)基因，鉴定EmLDH重组蛋白的免疫原性，初步评价其免疫诊断价值。方法采用RT-PCR方法克隆EmLDH基因，将其连接入pET15b表达载体中，构建重组表达质粒pET15b-EmLDH，转化至E.coliRosetta(DE3)感受态细胞进行诱导表达。通过SDS-PAGE检测重组蛋白的表达形式，Ni-IDA 树脂亲和层析纯化重组蛋白。通过Western blotting法鉴定EmLDH重组蛋白的免疫原性，ELISA法检测泡型包虫病患者(57例)、囊型包虫病患者(33例)和正常人(50例)血清，初步评价EmLDH重组蛋白的免疫诊断效果。结果成功克隆了EmLDH基因并表达纯化出相应的重组蛋白。Western blotting结果显示，EmLDH重组蛋白可被泡型和囊型包虫病患者血清识别，而不被正常人血清识别。ELISA结果显示，EmLDH重组蛋白对泡型和囊型包虫病患者血清的诊断敏感性分别为84.21%和84.85%。结论EmLDH重组蛋白具有较高的免疫原性，对包虫病具有较好的免疫诊断价值。

多房棘球蚴；LDH基因；克隆；表达；免疫原性

多房棘球绦虫是一种可引起人兽共患病的寄生虫，集中分布于北半球高纬度地区[1]。由其幼虫侵染机体引起的泡型包虫病对人体健康和畜牧业发展危害极大，是许多国家和地区严重的公共卫生问题之一[2-3]。快速灵敏的诊断方法对该病的防治十分重要。免疫诊断是包虫病临床诊断研究的一项重要内容，选择适宜的特异性抗原是决定包虫病免疫诊断准确性的关键[4-5]。目前，利用基因工程技术筛选和鉴定棘球蚴特异性抗原是包虫病免疫诊断研究的主要方向[6-8]。……