霍乱弧菌毒力基因zot的克隆表达及生物活性

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·论著·

霍乱弧菌毒力基因zot的克隆表达及生物活性

熊长辉，杨梦，刘晓青，王鹏，徐晓倩

目的对霍乱弧菌zot毒力基因进行表达并研究重组蛋白的生物活性。方法从霍乱弧菌(Vibrio cholerae)MO45中克隆zot的全基因序列，构建其原核表达质粒pET-32a(+)-zot并转化至大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中，通过诱导表达和亲和层析纯化重组蛋白，研究zot表达蛋白对人小肠上皮细胞的凋亡作用。结果纯化蛋白的浓度为0.324 mg/mL，经Western blot验证表达蛋白为目的蛋白，用流式细胞仪检测经表达蛋白作用的人小肠上皮细胞显示重组zot蛋白能引起人小肠上皮细胞的早期凋亡。结论成功克隆表达了霍乱弧菌毒力基因zot，重组蛋白能引起人小肠上皮细胞的早期凋亡。

霍乱弧菌；克隆表达；zot基因；人小肠上皮细胞

霍乱是由霍乱弧菌引起的急性水样便为主要特征的肠道传染病。由于仅有部分霍乱弧菌菌株可以引起霍乱流行，因此研究毒力基因分布和DNA分子特征，已成为目前学者们关注的重要课题[1]。霍乱毒力基因的分布特性为毒力因子产生水平转移提供了环境毒力贮存库，成为霍乱持续流行的重要因素[2]。外环境中大多数非致病性霍乱弧菌，经过复杂的进化和变异，某些特定的菌株可通过获得毒力而有效定植在人类小肠并释放肠毒素致病，其过程涉及多个毒力因子的协调作用[3-4]。在一定条件下，非流行株和非产毒株同样可以感染人体引起腹泻[5]。近年来发现，一些 O1/O139 群霍乱弧菌非产毒株也可以引起霍乱样腹泻[6]。zot毒力基因是检测霍乱弧菌毒力强弱的第2个指标，其编码的毒素增加肠黏膜通透性以及细胞间结构的耦合，本研究对霍乱弧菌zot毒力基因进行表达并研究表达蛋白对人小肠上皮细胞的作用。……