猪戊型肝炎病毒SYBR GreenⅡ荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

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·论著·

猪戊型肝炎病毒SYBR GreenⅡ荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

李幽幽1，龚双燕1，李小璟1，毛汐语1，邓益超1，朱玲1,2，徐志文1,2

目的建立一种快速检测猪戊型肝炎病毒(HEV)的方法。方法针对HEVORF2基因保守序列设计1对引物，基于SYBR Green Ⅱ染料，建立了检测HEV的实时荧光定量RT-PCR方法。结果该方法只能对猪戊型肝炎病毒检测到荧光，对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪嵴病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒均不能检测到荧光信号，特异性好；检测HEV时，在4.10×102～4.10×108拷贝/μL内具有良好的线性关系，灵敏度可以达到1.00×102拷贝/μL,扩增相关系数为0.996，扩增产物的熔解温度为84.0 ℃±0.1 ℃，该检测方法组内变异系数为0.83%～0.94%，组间变异系数为0.83%～0.94%，重复性较好。利用该方法对临床61份来自四川各地的猪肠内容物进行检测，检出9份阳性，且与常规PCR检测方法的阳性符合率为100%。结论建立的针对HEV的荧光定量RT-PCR有效可行，对HEV的临床检测和进一步研究奠定了基础。

猪戊型肝炎病毒；SYBR GreenⅡ；荧光定量RT-PCR

HEV属于肝炎病毒科(HepeviridaeFamily)肝炎病毒属(Hepevirus)，是单股正链无囊膜的RNA病毒，呈球形，直径32～34 nm，核衣壳呈二十面体立体对称。基因组长约7.2 kb，由3个开放式阅读框架组成。HEV分为4个主要基因型[1]，HEV-1主要分布在亚洲和非洲国家；HEV-2见于墨西哥和尼日利亚；HEV-3分布于美国和欧洲国家[2]，但近年来发现也存在与日本、韩国、中国大陆和中国台湾；HEV-4主要分布于中国、日本和越南。我国存在的主要是1型和4型[3-5]。

该病毒的主要传播途径是粪口传播，即通过饮用被污染的水和食用被污染的食物而感染[6-8]。……