褶牡蛎金属硫蛋白基因的克隆及组织表达分析

阎光宇，孙继鹏，易瑞灶，苏永全

( 1.国家海洋局 第三海洋研究所，福建 厦门 361005； 2.厦门大学，福建 厦门 361005；3.国家海洋局 海洋生物资源综合利用工程技术研究中心，福建 厦门 361005 )

褶牡蛎金属硫蛋白基因的克隆及组织表达分析

阎光宇1,2,3，孙继鹏1,3，易瑞灶1,3，苏永全2

( 1.国家海洋局 第三海洋研究所，福建 厦门 361005； 2.厦门大学，福建 厦门 361005；3.国家海洋局 海洋生物资源综合利用工程技术研究中心，福建 厦门 361005 )

金属硫蛋白是一类广泛存在于生物体中的低分子质量、富含半胱氨酸、高度诱导性的内源金属结合蛋白。采用RACE技术，首次获得了褶牡蛎金属硫蛋白基因的全长cDNA序列。该序列全长500 bp，由长54 bp的5′非翻译区，122 bp的3′非翻译区和324 bp的开放阅读框组成，共编码107个氨基酸。该蛋白序列中半胱氨酸含量丰富(28%)，不含芳香族氨基酸，富含金属硫蛋白典型的Cys-X(1-3)-Cys结构，存在软体动物等无脊椎动物金属硫蛋白特征序列，是金属硫蛋白家族成员。荧光定量PCR法，测定褶牡蛎体内3种组织(内脏团、鳃、外套膜)中金属硫蛋白mRNA组织特异性表达以及重金属(Cd2+、Zn2+)慢毒胁迫效应。结果表明，金属硫蛋白mRNA在褶牡蛎内脏团中相对表达量最高；褶牡蛎内脏团金属硫蛋白mRNA表达量与重金属胁迫时间呈现出一定时间效应关系，从胁迫开始至7 d表现为正调，而7～10 d开始为负调，Cd2+胁迫和Zn2+联合Cd2+胁迫下金属硫蛋白 mRNA表达量显著增加，最大表达量为对照组的42.5倍(Cd)，Zn2+联合Cd2+胁迫表现为拮抗作用。本试验结果为生产实践上在多种重金属污染下应用金属硫蛋白作为生物标志物监测水域污染状况，保护水生生态环境提供了依据。……