3种屏南产菝葜、重楼、黄精药材的品质分析

朱仙慕，黄 群，陈 丹，马国萍，黄 娇，谢 平

（福建中医药大学药学院，福建 福州 350122）

3种屏南产菝葜、重楼、黄精药材的品质分析

朱仙慕，黄 群，陈 丹，马国萍，黄 娇，谢 平

（福建中医药大学药学院，福建 福州 350122）

目的 鉴别屏南产菝葜、重楼、黄精3种药材，检测黄精药材多糖含量，评价3种药材的品质。 方法 根据《中华人民共和国药典2015年版（一部）》相关规定对3种药材进行薄层色谱鉴别以及黄精药材含量测定。 结果 屏南菝葜药材供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；屏南重楼供试品色谱中，与对照药材色谱的相应位置在主成分含量上表现出差异；屏南黄精供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；建立了黄精多糖含量的UV测定方法，以无水葡萄糖为对照品在3.34～20.05 μg／mL范围内线性关系良好，回归方程为A＝4.47×10－2C－5.64×10－2（r＝0.999 2）。 结论 建立了 3种薄层色谱鉴别方法以及黄精多糖含量测定的分析方法，为3种药材的品质评价及质量分析提供了实验依据。

薄层色谱鉴别；菝葜；重楼；黄精；多糖

菝葜为百合科植物菝葜 Smilax China L.的干燥根茎，具有消肿止痛、活血化瘀、祛风利湿等作用［1］308-309，临床常用于治疗妇科炎症，疗效显著，菝葜中主要含有皂苷、黄酮、鞣质等化学成分［2］。重楼为百合科植物云南重楼Paris polyphylla Smith var.yunnanensis（Franch.）Hand.-Mazz.或七叶一枝花Paris polyphylla Smith var.chinensis （Franch.） Hara的干燥根茎［1］260，其药理作用广泛，药理活性强。黄精为百合科植物滇黄精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.、黄精 Polygonatum sibiricum Red.或多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根茎，具有补气养阴、健脾、润肺、益肾等功效［1］306-307。 黄精的化学成分主要包括多糖、三萜、生物碱、黄酮及挥发油等，其中多糖类成分在黄精中含量较大，为其主要药效成分［3］。为调研屏南产药用植物菝葜、重楼、黄精3种药材品质，实验依据《中华人民共和国药典2015年版（一部）》［1］对其进行了初步的品质分析，为地产药材种植开发奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 UV-4802型双光束紫外可见分光光度计［尤尼柯（上海）仪器有限公司］；ARA520万分之一电子天平［梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司］；ZF1-I多功能紫外分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）。

1.2 试药 菝葜、重楼、黄精（2017年3月采自福建屏南县，由福建中医药大学中药鉴定教研室范世明高级实验师鉴定）；重楼对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121157-201003）；黄精对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121341-200402）；薄层层析用硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；薯蓣皂苷元对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111539-200001）；D-无水葡萄糖对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110833-200302）；95%乙醇、盐酸、氢氧化钠等其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 菝葜薄层色谱鉴别

2.1.1 供试品溶液的制备 取本品粉末5 g，加乙醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液加盐酸5 mL，加热回流2 h，放冷，用40%氢氧化钠溶液调至中性，蒸至无醇味，残渣加热水40 mL使溶解，用二氯甲烷振摇提取 2次（40 mL、30 mL），合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，即得。

2.1.2 对照品溶液的制备 另取薯蓣皂苷元对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。

2.1.3 薄层色谱鉴别 吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。实验结果表明：菝葜药材供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；菝葜药材含有主成分薯蓣皂苷元。结果见图1。

2.2 重楼薄层色谱鉴别

2.2.1 供试品溶液的制备 取本品粉末0.5 g，加乙醇10 mL，加热回流30 min，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备 另取重楼对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。

2.2.3 薄层色谱鉴别 吸取供试品溶液和对照药材溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（15∶5∶1）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯（365 nm）下检视。实验结果表明：日光和紫外光灯下检视供试品色谱中，在与对照药材色谱的相应位置上，从上至下第2、4、8斑点差异明显，原点附近斑点也表现出差异，提示重楼与对照重楼药材的主成分含量上表现出差异，且其他成分的含量也有所差异。结果见图2。

图1 菝葜薄层色谱鉴别图

图2 重楼薄层色谱鉴别图

2.3 黄精药材薄层色谱鉴别

2.3.1 供试品溶液的制备 取本品粉末1 g，加70%乙醇20 mL，加热回流1 h，抽滤，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，加正丁醇振摇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，即得。

2.3.2 对照品溶液的制备 另取黄精对照药材l g，同法制成对照药材溶液，即得。

2.3.3 薄层色谱鉴别 吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-甲酸（5∶2∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。实验结果表明：黄精供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。提示黄精药材主成分与对照药材相似。结果见图3。

图3 黄精薄层色谱鉴别图

2.4 黄精多糖的含量测定

2.4.1 对照品溶液的制备 取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品33 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每l mL中含无水葡萄糖0.33 mg）。

2.4.2 供试品溶液的制备 取60°C干燥至恒重的本品细粉约0.25 g，精密称定；置圆底烧瓶中，加80%乙醇150 mL，置水浴中加热回流1 h，趁热滤过；残渣用80%热乙醇洗涤3次，每次10 mL；将残渣及滤纸置烧瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加热回流1 h，趁热滤过；残渣及烧瓶用热水洗涤4次，每次10 mL；合并滤液与洗液，放冷，转移至250 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

2.4.3 标准曲线制备及线性关系考察 精密量取对照品溶液 0.l、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分别置10 mL具塞刻度试管中，各加水至2.0 mL，摇匀；在冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后置水浴中保温10 min，取出，立即置冰水浴中冷却10 min，取出，以相应试剂为空白。采用紫外-可见分光光度法，在582 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。以吸光度A值对浓度（μg／mL）进行线性回归，其回归方 程 为 A＝4.47×10－2C－5.64×10－2，r＝0.999 2。实验结果表明：葡萄糖浓度在3.34～20.05 μg／mL范围内，其吸光度与浓度有良好的线性关系。结果见表1、图4。

表1 葡萄糖标准曲线

2.4.4 黄精多糖含量测定 精密量取供试品溶液1 mL，置10 mL具塞干燥试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至2.0 mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含无水葡萄糖的重量（mg），计算，即得。本品按干燥品计算，含黄精多糖以无水葡萄糖（C6H12O6）计，不得少于7.0%。实验结果表明：3批黄精的多糖平均含量分别为7.61%、6.80%、7.22%，RSD 分别为 2.94%、0.68%、2.62%。结果见表2。

图4 葡萄糖的标准曲线图

表2 黄精多糖含量测定结果（n＝3）

3 讨 论

3.1 依据《中华人民共和国药典2015年版（一部）》［1］采用薄层色谱法鉴别菝葜、重楼和黄精，结果表明：屏南菝葜药材含有主成分为薯蓣皂苷元；屏南重楼药材与重楼对照药材品质有所差异，且从重楼的薄层板上斑点的颜色深浅初步判断，重楼药材斑点颜色较对照药材的浅，某些成分含量略低，甚至没有；屏南黄精药材主成分与黄精对照药材相似，香草醛-浓硫酸显色剂在挥发油、萜类、甾类和皂苷等中药成分的薄层分离中，多能显示出颜色各异的斑点［4］，其中黄精化学成分中甾体皂苷类含量较大，故为其主要功效成分。

3.2 蒽酮-硫酸法是利用浓硫酸将多糖类化合物脱水、水解后形成单糖，并迅速生成糠醛衍生物，其与蒽酮试剂反应显色，并于582 nm波长下有最大吸光度［5］。操作过程中蒽酮-硫酸溶液不稳定，宜现用现配，并注意避光。

3.3 黄精多糖含量的高低与药材的产地、采收时间、品种、生态环境以及储藏方式等多种因素有关［6］。3月份采收的屏南黄精的多糖含量测定结果偏低，这与采摘季节有一定关系，故还需进一步的考察。

［1］ 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典2015 年版（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2015：308-309，260，306-307.

［2］ 干国平，于伟，孙进，等.不同产地菝葜中总黄酮的含量考察［J］.中国医院药学杂志，2008，28（23）：2055-2056.

［3］ 陈辉，冯珊珊，孙彦君，等.3种药用黄精的化学成分及药理活性研究进展［J］.中草药，2015，46（15）：2329-2338.

［4］ 姚乾元，贾元印.香草醛-浓硫酸薄层色谱显色剂的改进［J］.中药通报，1986（7）：25-47.

［5］ 曾哲灵，熊涛，吕伟.蒽酮-硫酸法测定大蒜多糖含量［J］.食品科学，2008，29（9）：499-502.

［6］ 洪迪清，王世清，高晨曦，等.黔产黄精的多糖含量测定［J］.中国当代医药，2009，16（11）：76-77.

R284.1

A

1000-338X（2017）06-0047-03

2017-09-18

福建省科技计划项目（2010Y2004）

朱仙慕（1993—），女，硕士研究生，主要从事中药制剂与质量分析研究。

陈丹（1961—），女，博士，教授。E-mail：13515026709@163.com