Vero细胞微载体悬浮培养生产工艺研究

王景庆 游松 张微

（沈阳药科大学 辽宁 沈阳 110016）

动物细胞的体外培养已经广泛应用于药品特别是疫苗的生产中，通过生物反应器对Vero细胞和病毒进行大规模、高密度培养，并通过此方式进一步生产狂犬、乙脑等疫苗在国内已经为主流技术[1]。Vero细胞是一种典型的贴壁依赖性动物细胞，其生长、扩增繁殖需要有足够大的表面积，球状微载体悬浮培养这一技术平台很好的解决了以上的限制因素。因为很多种类的病毒（如狂犬病毒等）都是通过细胞表面吸附这一途径，进入到细胞中，然后利用细胞中的有效物质来繁殖。所以Vero细胞的大规模、高密度培养是生产过程中相当关键的一个步骤。本文重点是通过优化并更加合理的设置生物反应器的运行参数，以达到更良好的生产条件。

表1 细胞培养情况表

表2 细胞培养情况表

1.材料与方法

1.1 主要材料

138-143代Vero细胞（美国ATCC），M199和DME培养基，细胞培养时加5% 新生牛血清，微载体为Cytodex1[2，3]。

1.2 主要仪器

生物反应器为美国EPPENDORF公司CelliGen510型生物反应器（40L），倒置显微镜。

1.3 实验方法

1.3.1 Vero细胞的复苏准备：取第138代细胞，37℃乙醇浴融化；接种细胞到含有10%牛血清培养液的细胞瓶中，37℃培养；6～24小时后更换10%牛血清培养液；细胞代次为139代。

1.3.2 细胞培养：37℃、10%牛血清培养液培养，三次扩增达到可以进行生物反应器培养的细胞数量。

1.3.3 微载体的准备：按照15～20g/L生物反应器体积的比例称量微载体，用PBS溶液浸泡并121℃湿热灭菌60分钟；灭菌后的微载体用培养液进行平衡，室温浸泡72小时后使用。

1.3.4 生物反应器的准备：正确安装培养液流加管、搅拌浆、沉降柱等配件；……