杜氏盐藻无菌体系的建立

宋程飞，郝敬云，程蔚兰，史飞飞，季春丽，李润植

（山西农业大学分子农业与生物能源研究所，山西 太谷 030801）

杜氏盐藻（Dunaliella sallina）是一种单细胞、无细胞壁的绿藻，在高盐环境下能够正常生长，是迄今为止发现的最耐盐的真核藻种之一[1-3]。盐藻的营养价值较高，它合成积累的β-胡萝卜素可被用作食品添加剂与着色剂、饲料添加剂、复合维生素制剂、化妆品中的抗氧化剂等[4-5]。此外，盐藻富含多种氨基酸、微量元素、多糖、虾青素及甘油等极具经济价值的成分。盐藻还是一种优良的生物反应器[6-7]，经基因工程改良可用于生产多种高值化合物。由于盐藻细胞结构简单、较易培养且自身营养丰富，使得其成为微藻研究和规模化培养开发利用的理想生物种质材料[8-9]。与其他真核微藻相比，盐藻细胞带菌少，但在培养过程中，特别是大规模培养时，杂菌污染依然存在，严重影响试验结果，制约盐藻商业化开发利用[10]。

有研究表明，真核藻细胞对多种抗生素有较好的耐受性，而链霉素有时还能促进一些真核藻类的生长[11]。盐藻与细菌极易形成共生体系，不易除去。王长海等[12-13]报道了带菌生长的盐藻生长速度很快，但稳定期的时间却明显减少，稳定期天数不到无菌盐藻的1/4。稳定期是盐藻细胞中类胡萝卜素等代谢产物积累的主要时期。因此，建立杜氏盐藻无菌培养体系，进而延长其稳定期，对增加藻细胞中高附加值天然产物的含量是至关重要的。

常用的微藻藻种纯化方法主要有抗生素法[14]、毛细管显微分离法[15-17]、离心洗涤法[18]和稀释过滤法[19]等。……