乙酰肝素酶介导心肌细胞凋亡的研究

曹洪帅，韩轩茂*

（1.内蒙古科技大学包头医学院，内蒙古 包头 014040；2.包头医学院第一附属医院心内一科，内蒙古 包头 014040）

硫酸乙酰肝素酶（HPSE）是一种内切性β-D-葡萄糖醛酸糖苷酶，是哺乳动物细胞中唯一可以切割细胞表面的硫酸乙酰肝素侧链的酶，参加细胞外重塑。HPSE涉及多种生理过程如胚胎植入，组织修复和炎症过程；病理致病过程主要包括肿瘤的进展和肾脏疾病[1]。研究表明，HPSE在多种恶性肿瘤病理发展过程中呈现高表达、高活性状态，有可能成为一个抗肿瘤治疗的新靶点[2]。HPSE作为一个新的靶向治疗位点正在逐渐被人们所认识。近期发现，HPSE在大鼠缺血再灌注损伤（I/R）模型中有影响作用[3]，但迄今为止，尚未见缺血过程中心肌细胞自身HPSE表达、调控及凋亡的研究报告。本实验通过培养H9C2心肌细胞，复制缺氧/复氧损伤模型，模拟临床上MIRI，并用HPSE抑制剂进行干预，进而探讨HPSE对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤后的影响作用。

1 资料与方法

1.1 实验药物

OGT2115

1.2 细胞

H9C2心肌细胞（武汉普诺赛生命科技有限公司）

1.3 试剂

DMEM高糖培养基，胰酶，PBS，胎牛血清，MTT粉末，青霉素链霉素混合液，DMSO。

1.4 仪器

CO2培养箱，荧光倒置显微镜，酶标仪。

1.5 方法

1.5.1 细胞培养

配置培养基：10%胎牛血清（BSA）、1%青霉素链霉素混合液的DMEM培养基。培养 H9C2心肌细胞，置于常规培养箱培养，待细胞生长80%满时，进行细胞传代，2～3天传代1次，用于后续实验。

1.5.2 复制H9C2心肌细胞缺氧/复氧模型

细胞生长80%满后，将细胞的培养基换成PBS，置于缺氧装置中孵育4h（缺氧时间超过时，许多调亡细胞团漂浮于培养基中，易造成极大误差，因此本实验细胞缺氧时间定为4h），缺氧处理后更换含10%BSA 的DMEM培养基，置于常规培养箱中培养3 h，模型建立完成。……