HPLC法考察马蹄甲中阿维菌素的残留

刘丽+李正刚

【中图分类号】R657 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2017）12--02

马蹄甲（Equus caballus orientalis Noack）为马科动物马Equus caballus（L.）的蹄甲入药，属于奇蹄目马科马属。其来源马在夏天多雨的季节，都会感染皮肤病。螨虫病时有发生，，发病马匹多在眼睑周围、额部、鼻部、嘴唇、颈下部、肘部和四肢远端出现脱毛、秃斑，治疗通常采取肌肉注射或者口服阿维菌素，驱除体内、外寄生虫，疗效好，给药方便。

近年来，随着人们对动物源产品由需求型向质量型的转变，动物药中的兽药残留已逐渐成为全世界关注的一个焦点。食品添加剂和污染物联合专家委员会从20世纪60年代起开始评价有关兽药残留的毒性，为人们认识兽药残留的危害及其控制提供了科学依据。因此，本文对动物药马蹄甲来源马常用药阿维菌素进行药物残留检测，为马蹄甲的进一步开发使用提供安全保障。

1 试剂和材料

1.1 试剂 ：丙酮（C3H6O）：色谱纯；甲醇（CH4O）：色谱纯。

1.4 阿维菌素标准品：CA10001000，Lot：114223，含量96.4%，来源：Dr.Ehrenstorfer GmbH。

1.3 標准溶液配制

1.3.1 阿维菌素标准储备液：称取0.1 g（准确至0.0002 g） 阿维菌素标准品于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度配制成浓度为1.0 mg/mL的标准储备液。

1.3.2 阿维菌素标准工作液：根据需要移取适量的阿维菌素标准储备液，用甲醇稀释成适当浓度的标准。标准工作液需每周配制一次。

2 仪器和设备

高效液相色谱仪型号：Agilent1260，配有二极管阵列检测器； BP211D型分析天平；组织捣碎机；HY-2型调速多用振荡器；EV311型旋转蒸发器； 固相萃取柱：SPE C18。

3 高效液相色谱参考条件

色谱柱：WondaCract ODS- 2.5μm，4.6×250mm，C/N 8520-3993；流动相：甲醇：水=（90+10，V/V）；流速：1.0 mL/min；检测波长：245 nm；柱温：40 ℃；进样量：20 μL。

4 分析步骤

4.1 提取

称取试样约20 g（精确至0.1 g）于100 mL具塞锥形瓶中，加入50 mL丙酮，于振荡器上振荡0.5 h用布氏漏斗抽滤，用20 mL×2丙酮洗涤锥形瓶及残渣。合并丙酮提取液，于40 ℃水浴旋转蒸发至约2 mL。

4.2 净化。将上述的浓缩提取液完全转入SPE C18柱，再用5 mL水淋洗，去掉淋洗液。最后用5 mL甲醇洗脱，收集洗脱液，用氮气吹至近干。准确加入1.0 mL甲醇溶解残渣，用0.45 μm滤膜过滤，滤液供液相色谱测定。外标法定量。

5 系统适应性考察

5.1 空白试验。取空白试料采用完全相同的测定步骤进行平行操作，无干扰峰出现。见图1。

5.2 线性：准确量取适量阿维菌素标准贮备液，用水配制成阿维菌素浓度为0.2μg/mL，0.4μg/mL，1.0μg/mL，5μg/mL，10μg/mL，20μg/mL的标准系列工作液，依次进行测定，以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线，通过回归计算，得到回归方程：Y=3.40X+0.148，r=0.999，结果表明线性关系良好。见图2。

5.3 精密度试验。称取试样6份，每份20.0g ，分别加入9.734μg/mL的阿维菌素标准溶液100μl，按照4.1、4.2操作进行提取和净化，对照品采用线性对照品（浓度：0.973g/mL），按液相色谱法测定，RSD为1.0%，结果表明精密度良好。

5.4 回收率试验

称取试样9份，每份20.0g，每三份分别加入阿维菌素标准工作溶液（0.195μg/mL、0.973μg/mL、9.734μg/mL）各1.0ml，按样品同法制备，对照品采用线性对照品（浓度：0.973g/mL），按液相色谱条件进样测定，计算回收率，平均回收率分别为90.5%，91.4%，96.1%。

5.5 样品测定

取样品3批，按4.1、4.2操作进行提取和净化，按液相色谱条件进样测定，计算含量，3批样品阿维菌素均未检出。见图3。

5 结论

本实验建立了马蹄甲中阿维菌素药物残留的高效液相色谱法，其前处理简单，灵敏度高，准确度高，精密度和各项技术符合残留检测的相关要求，可用于马蹄甲中阿维菌素药物残留的检测。

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