欧前胡素通过上调细胞表面死亡受体5的数量增强TRAIL对乳腺癌细胞的杀伤活性*

徐正阳， 任瑞平， 万 鹏， 袁祖国

(宁波市鄞州人民医院放化疗科， 浙江 宁波 315040)

乳腺癌是在女性群体中发病率最高的恶性肿瘤，早期容易发生肿瘤转移，预后很差，严重危害女性健康[1]。在乳腺癌的治疗中，手术治疗是目前最有效的治疗手段，然而对于中晚期不能进行手术的病人或在术后的巩固治疗中，化疗或免疫治疗是不可缺少的治疗手段[2]。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL)属于肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)超家族成员。研究表明， TRAIL能选择性激活肿瘤细胞的凋亡通路而对正常细胞的无明显影响，因此， TRAIL是一种副作用很小的非常有临床应用前景的肿瘤免疫治疗药物[3-4]。然而， 某些类型的肿瘤细胞(如乳腺癌细胞)对TRAIL治疗的敏感性较低[5]，因此为了提高乳腺癌细胞对TRAIL治疗的敏感性，采取一些辅助治疗(如辅以中药活性成分)协同TRAIL杀伤肿瘤细胞具有十分重要的意义。本研究的目的在于探讨中药活性成分欧前胡素(imperation，IMP)对TRAIL的抗乳腺癌协同效应及分子机制。

材 料 和 方 法

1 细胞培养

人乳腺癌细胞系T-47D和MCF-7购于美国模式培养物保存中心(American Type Culture Collection，ATCC)。细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37 °C恒温培养箱中培养并通入5% CO2。细胞每2～3 d传代1次，传代时，用胰酶消化液悬浮细胞， 并用DMEM培养基洗涤2次，将细胞悬液按1∶3稀释后传代。

2 实验试剂

欧前胡素、重组人TRAIL、MTT试剂、二氢乙啶(dihydroe-thidium, DHE)、N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)和凋亡检测试剂盒购于Sigma-Aldrich；DMEM培养基购于Gibco；抗死亡受体5(death receptor 5，DR5)、cleaved caspase-8、cleaved caspase-3和GAPDH抗体购于Cell Signaling；ECL试剂盒购于Pierce；DR5-PE流式细胞抗体购于R&D system；JC-1线粒体膜电位探针染料购于江苏碧云天生物技术有限公司；……