牛血清蛋白在MnHCF修饰电极上的电化学行为及测定

李楠楠　王璐

牛血清白蛋白就是我们常说的BSA，相对分子质量为10的4次方这个级别，它不是一定的，是多聚物，在做PCR的时候会用到它。本文把铁氰化锰修饰在玻碳电极表面，首次研究了牛血清蛋白在修饰电极表面的电化学行为。

1 实验部分

1.1 试剂

牛血清蛋白，无水乙醇，氢氧化钠，氯化钾等。

1.2 仪器

LK98BⅡ微机电化学分析系统，Al204i型电子天平，PHS—3B型PH计，KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器，微电脑微波化学反应器LWMC-201 ，二两装高速中药粉碎机，PHS-3B型pH计。

1.3 实验方法

1.3.1 溶液的配置

0.05moL/L 磷酸缓冲溶液（PBS）由1.0moL/L NaCl+0.01mo/LKCl+0.05moL/L磷酸氢二钠+0.004moL/L磷酸二氢钾组成；0.6moL/L铁氰化锰修饰剂由0.6moL/L铁氰化鉀和0.6moL/L硫酸锰组成，由PBS缓冲溶液定容；取10mg牛血清蛋白于50mL烧杯中、取NaCl1.46g于50mL烧杯中、取36%～38%的盐酸9.27mL于50mL烧杯中，分别加少量去离子水稀释后再分别转移至100mL、50mL、50mL容量瓶中用去离子水定容至刻度，制成牛血清蛋白、0.5moL/L NaCl、6.0moL/L HCl溶液。

2 结果与讨论

2.1 修饰时间的影响

取已配制好的铁氰化锰修饰剂溶液50mL于小烧杯中，将清洗、晾干好的三电极体系置于烧杯中，在扫描速度为300mv/s的条件下，富集电位（+2v，-2v）的区间内，循环扫描一定时间修饰电极，发现随着修饰时间的增加电极催化活性变强，修饰达60min后膜催化活性增加不明显，综合考虑工作效率等因素，最后确定修饰时间为60min。

2.2 pH值的影响

分别取已配制好的0.5mol/LNaCl溶液7mL和牛血清蛋白溶液4mL（即0.008g/L）于9个50mL的小烧杯中，各滴加HCl溶液并用pH计调节溶液pH值分别为0～8。在电位-2.0V～+2.0V内，扫速300mv/s的条件下，分别进行线性伏安扫描。

结果表明，随着pH值的增大峰电位变化不大，但是峰电流随着随着pH值的减小而增大，当pH大于6时，还原峰电流无明显变化。由于牛血清蛋白氧化峰电流在pH较低时较稳定，且还原峰峰形最好，故选择在HCl为0.6moL/L（即pH=0）环境下进行测试。综上所述，测定体系确定为0.07moL/L NaCl-0.6moL/L HCl。

2.3 富集电位的影响

取已配制好的6mol/LHCl溶液5mL和0.5mol/LNaCl溶液7mL于50mL的小烧杯中，加入牛血清蛋白溶液4mL进行循环伏安扫描，考查了不同的富集电位（+2.0V～-2.0V）对峰电流的影响，数据如表1所示。

结果表明不同的富集电位对峰电流有影响。电位区间在（-2.0v，+2.0v）内的峰电流最大，为最佳富集电位范围。

2.4 牛血清在铁氰化锰修饰电极上的电化学行为

取已配制好的6mol/LHCl溶液5mL和0.5mol/LNaCl溶液7mL于50mL的小烧杯中，加入牛血清蛋白溶液4mL（即0.008g/L），在-2.0V～+2.0V内，扫描速度为300mV/s的条件下分别以裸玻碳电极和修饰电极对0.008g/L牛血清蛋白进行循环扫描，结果如图1所示。

由图1曲线a可知，在电位窗口+2.0～-2.0V内无明显还原峰出现，表明牛血清蛋白在裸玻碳电极上不能直接发生还原反应。而在铁氰化锰修饰电极上牛血清蛋白在+1V～-0.5V处出现了还原峰，反向扫描时没有观察到相应的氧化峰（曲线b）。这表明铁氰化锰对牛血清蛋白的还原反应具有良好的催化作用，但该反应为不可逆过程。

作者单位：1.长治市农产品质量安全检验监测中心；

2.西安京诚检测技术有限公司