小儿氨酚烷胺颗粒中人工牛黄含量测定及质量分析

田运佳，杨凤巧，曹 旭，刘 涛，王群葆，李 斌

(邢台市食品药品检验所 化学室，邢台 054000)

小儿氨酚烷胺颗粒是儿童常用感冒药，处方主要由对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、人工牛黄、咖啡因、马来酸氯苯那敏及辅料组成。其中人工牛黄由胆红素、胆酸、猪去氧胆酸、胆固醇、无机盐等配制而成[1]。胆红素作为人工牛黄主要有效成分之一，是评价人工牛黄质量的重要指标，标准规定含胆红素不得少于0. 63%[1]。全国现有15家生产企业生产该药，主要质量标准[2]未对药品中人工牛黄的含量加以检测。

本文参考文献报道的胆红素含量测定方法[3-5]，并经方法学验证后对来自流通领域的共11个生产企业的26批小儿氨酚烷胺颗粒的人工牛黄胆红素含量进行检测，进而评价该品种中人工牛黄胆红素的质量现状。

1 仪器与试药

仪器： Waters e2695高效液相色谱仪。

胆红素对照品(来源：中国药品生物制品检定所，批号：100077-200805)，甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性

色谱柱为Waters C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为甲醇-三氯甲烷-0.1%磷酸(88:6:6)；柱温为30℃；检测波长为449 nm；流速为0.8mL/min；进样量：10μl。在上述条件下胆红素能与样品中其他成分达到基线分离，分离度大于1.5，结果见图1。

A. 对照品溶液；B. 供试品溶液图1 HPLC色谱图

2.2 溶液的制备

(1)供试品溶液：取本品5袋内容物，置100mL锥形瓶中，精密加三氯甲烷-甲醇-水-盐酸(90:10:0.3:0.03)混合液25mL，称定重量，振摇使充分溶出，补足重量，滤过待测。

(2)对照品溶液：称取胆红素对照品11.98mg，置100mL棕色量瓶中，加三氯甲烷适量，振摇溶解并稀释至刻度，摇匀，再量取5mL，置100mL棕色量瓶中，用三氯甲烷稀释至刻度，摇匀。

2.3 线性关系

称取胆红素对照品，按“2.2(2)项下方法”配制成每1mL含胆红素0.6～24μg的溶液，依法测定。以峰面积(Y)与进样浓度(X)计算回归方程，结果表明胆红素在此范围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=50776X-7032.1 R=0.9997 (n=6)。

2.4 稳定性试验

取“2.3”项下6μg/mL的对照溶液分别室温下避光放置1～8h，依法测定。计算峰面积的RSD为0.8%(n=5)，表明胆红素对照品溶液在8h内稳定。

2.5 精密度试验

按“2.2(2)”项下方法配制每1ml约含胆红素5μg的对照品溶液，依法测定，连续进样6次，计算峰面积的RSD为0.3%(n=6)，结果见表3.。

2.6 重复性试验

取某批药品按“2.2(1)”项下的方法制备供试品溶液，独立测定6份。结果胆红素含量的RSD为1.8%，表明方法具有良好的重复性。

2.7 回收率试验

称取9份空白辅料，分别向辅料中加入三个不同浓度的胆红素对照品溶液，每个浓度做3份，照“2.2(1)”项下的方法制备溶液，依法测定，结果见表1。

表1 回收率实验(n=9)

2.8 样品测定结果

小儿氨酚烷胺颗粒中人工牛黄为4mg/袋[2]，若参考其它有效成分含量限度下限90%，并且人工牛黄中胆红素含量应不低于0.63%[1]，即胆红素理论标示量应不低于4×0.9×0.63%=0.0227mg/袋，参考胆红素应不得少于标示量的90%要求[1]，即胆红素理论值应不小于0.020mg/袋。本文对11个厂家26批样品进行测定。统计发现，26批样品中有3批次样品中胆红素含量略低于理论下限值，总数约12%的产品中胆红素含量低于理论下限值。

3 讨论

(1)胆红素作为人工牛黄的主要有效成分[1]，含量过高或过低直接影响药效甚至人体健康，胆红素能清除超氧阴离子自由基，在防御氧化毒性方面起着重要作用，同时它也有一定的毒性，可对大脑和神经系统引起不可逆的损害[6-7]，因此增加对小儿氨酚烷胺颗粒中人工牛黄胆红素的考察很有意义。人工牛黄成分多[1]，难以全面测定其成分含量，本文通过方法学验证，能准确的检测小儿氨酚烷胺颗粒中胆红素的含量，进而可以衡量药品中人工牛黄的含量。

(2)在“2.8”中，3批次药品胆红素含量略低于理论下限值可能是以下几点原因。

胆红素是一个直链的四吡咯化合物，遇热不稳定易分解，在加工、运输、储藏等过程中，可受热或光照等因素发生分解[6-7]；因标准中未要求对人工牛黄含量测定，可能会导致企业投料随意性大，按下限投料导致含量偏低；因人工牛黄原料来源、生产工艺不同，所含的胆红素也不尽相同，原料人工牛黄中胆红素偏低，也会造成药品企业成品药胆红素偏低。

综上所述, 现行标准中没有对小儿氨酚烷胺颗粒中人工牛黄的检测，而实际复方制剂药品中的人工牛黄确有低于理论最小值的情况存在，因此建议加入对人工牛黄中胆红素的测定来更好的控制药品的质量。

[1] 中国药典[S].2015年版.一部.5-6.

[2] 国家药典委员会.化学药品地方标准上升国家标准：第十二册 WS-10001-(HD-1115)-2002[S].北京:国家药典委员会，2002:54

[3] 黄海萍，谭桂山，人工牛黄中胆红素研究进展[J]. 中国药事，2005，19(2)：114-116.

[4] 陈剑，刘频健，王晓一，HPLC法测定复方制剂中人工牛黄的胆红素含量[J].安徽农业科学, 2009，37(21) ：9839 -9840.

[5] 曹流，孙冶，曹澜，人工牛黄中胆红素含量测定的影响因素[J]. 中国卫生工程学,2005，4(2)：91-92.

[6] 黄海萍,谭桂山，人工牛黄中胆红素研究进展[J].中国药事,2005，19 (2):114-115.

[7] 范丽艳，徐酉华，新生儿胆红素脑病的研究进展[J]. 儿科药学杂志,2016，22(9)：50-54.