鹦鹉隐孢子虫血清流行病学调查

于建华

（延边大学农学院 133000）

隐孢子虫（Cryptosporidia）寄生在脊椎动物体内，是一种广泛分布在世界各地的原虫，是导致人类腹泻性疾病的原因之一。目前，隐孢子虫广泛地分布在世界各个地区，被证实是导致人类腹泻性疾病的重要病因之一[1]。我国对宠物市场的条例和规范，宠物鸟的疫病防控和检测管理不规范。由于缺乏管理措施和检疫措施，以宠物作为病原携带者及传播媒介的一系列疾病，给宠物产业带来了重大的经济损失，同时严重危害了人类的身心健康，近些年来有很多关于禽类的隐孢子虫病的报道。该病可以通过检测宠物鸟的感染率间接体现出人类生活环境中该病原的污染程度。目前，国内关于鹦鹉隐孢子虫的流行病学报道很少，科研学者对禽类感染该病的研究甚少。为探讨隐孢子虫在鹦鹉中的流行情况，深入研究隐孢子虫的流行特点，为该病的进一步研究提供依据，本研究采用ELISA检测法对鹦鹉的隐孢子虫的感染情况进行调查研究，期望能对该病的深入研究奠定基础。

1 材料

1.1 被检血清

鹦鹉共计311只。其中雄性163只，雌性148只。小于5月龄 105只、6～12月龄 100只，13～18月龄 106只。

1.2 主要试剂

鸟隐孢子虫（Ab）ELISA试剂盒由上海诺渊实业有限公司提供。

2 方法

2.1 血清样本采集

将鹦鹉固定，用剪刀剪去胸前的羽毛，然后用酒精对皮肤进行消毒，最后用一次性采血针进行心脏采血。将血液在37℃温箱放置2h，然后移入4℃放置1h，取出后3000 r/min下离心5 min。将离心得到的上层血清转移到新的离心管中，做编号标记，置于-20℃冰箱内保存。

2.2 样品检测

检测鹦鹉血清中隐孢子虫的抗体水平使用ELISA试剂盒。

2.3 试验结果判定

试验的有效性：

阳性对照孔平均值≥1.00；阴性对照孔平均值≤0.10；

临界值计算（Cut-off）：临界值=阴性对照孔的平均值+0.15；

阴性判定标准：样品的OD值<临界值（Cut-off）则隐孢子虫抗体为阴性；

阳性判定标准：样品的OD值≥临界值（Cut-off）则隐孢子虫抗体为阳性。

3 被检样本血清抗体的检测结果

在本次研究中，共有311份鹦鹉血清，总计10份鹦鹉血清呈现隐孢子虫抗体阳性，阳性率为3.22%。其中亚历山大鹦鹉阳性率为0%，情侣鹦鹉阳性率为15.39%，雉尾鹦鹉阳性率为9.09%，虎皮鹦鹉的阳性率为1.98%，不同品种鹦鹉间的感染率有显著差异（P<0.05）。

4 结论

试验表明，鹦鹉中存在隐孢子虫感染，总体阳性率为3.22%。隐孢子虫的流行状况与鹦鹉的品种差异有关，与鹦鹉性别、年龄关系不大。

5 讨论

隐孢子虫寄生在脊椎动物体内，是一种广泛分布在世界各地的原虫，是导致人类腹泻性疾病的原因之一。自然环境中普遍存在隐孢子虫卵囊，当人与被感染的动物接触，饮用或食用被污染的水和食物都会引起隐孢子虫的感染。随着分子生物学技术的逐渐成熟，出现了越来越多的隐孢子虫检测方法，常用诊断方法有显微镜检测、血清学检测和分子生物学检测。早期的研究多使用改良抗酸染色法，该方法由于染色后易留下红色颗粒，镜下难以鉴别。使用PCR或基因探针发灵敏度高，且特异性强。对于血清样本，常采用ELISA和酶联免疫印迹试验（ELIB），特异性灵敏度都较好，可用于隐孢子虫病的流行病学调查。本研究采用酶联免疫吸附试验（ELISA），对购买于甘肃省市场的原产地在北京和潍坊2个地区的4种鹦鹉隐孢子虫抗体进行了调查。我国鹦鹉隐孢子虫总阳性率为3.22%。情侣鹦鹉血清中隐孢子虫抗体检出率为15.39%，雉尾鹦鹉中为9.09%，虎皮鹦鹉中为1.98%，亚历山大鹦鹉中为 0%（0/22，P＞0.05）。 雄性鹦鹉的感染率（3.68%）高于雌性鹦鹉（2.70%，P＞0.05）。 小于5月龄的鹦鹉（5.71%）感染率高于 6～12 月龄（4.00%）和 13～18 月龄（0）鹦鹉（P＞0.05）。 不同基因型隐孢子虫毒力不同，不同品种的鹦鹉对隐孢子虫的抵抗力不同，鹦鹉接触被隐孢子虫污染的传染源的几率不一样。