应用多重实时荧光PCR检测 蜡样芽胞杆菌毒力基因

刘 芳,陈国培,王远洋,郭正洋,陈 晶,刘钟栋,兰全学,*

(1.深圳市计量质量检测研究院,广东深圳 518000;2.河南工业大学,河南郑州 450000)

蜡样芽胞杆菌(Bacilluscereus)是一类在周围环境中广泛存在,革兰氏阳性兼性厌氧菌。该菌是一种常见的食源性致病菌,淀粉类,肉类,乳制品均有蜡样芽胞杆菌引起的食物中毒的报道[1]。该菌可引起呕吐和腹泻两种常见的食物中毒症状,呕吐毒素是一种小的热和酸稳定循环肽,因此被食用后在胃部不能被消化,在感染数个小时后即可引起呕吐;腹泻毒素则是由一组热不稳定的蛋白质组成,感染了蜡样芽胞杆菌的食物进入肠道后,细菌增殖代谢产生肠毒素,在8～16 h后引发腹泻[2-3]。

目前常用的检测蜡样芽胞杆菌的方法为传统生化方法,实验周期长(>72 h),重复性差,操作繁琐。免疫学检测方法利用抗原抗体免疫机理对蜡样芽胞杆菌进行检测,容易产生交叉反应,特异性不强,且价格昂贵,存在较大的应用局限性。近年来,由于实时荧光PCR重现性好、特异性强,作为快速准确的核酸分子定量和定性的手段，越来越多的运用于分子生物学领域。利用PCR技术检测蜡样芽胞杆菌的文献不少,例如王振国[4]利用溶血性肠毒素hblA基因作为目的基因,使用PCR方法来鉴定蜡样芽胞杆菌,结果特异性、灵敏性良好。Wehrle[5]等溶血性肠毒素hbl,非溶血性肠毒素nhe和细胞毒力基因cytK设计引物构建多重PCR体系,对引起腹泻的蜡样芽胞杆菌进行了检测。蒋培余等[6]设计了一个多重实时荧光PCR体系来鉴定蜡样芽胞杆菌和金黄色葡萄球菌。但……