微生物鉴定技术在药品生产中运用研究

万清峰

【摘要】文章通过阐述微生物鉴定技术的内涵特征，对微生物鉴定技术在药品生产中运用及药品生产中的微生物污染控制策略展开探讨，旨在为研究如何促进药品生产的安全有序开展提供必要思路。

【关键词】微生物鉴定技术;药品;生产

药品微生物检测结果受诸多因素影响，例如产品抗菌性及抑菌性、微生物分布不均匀等。所以，对于药品生产而言，要想保证检测结果的可靠性，务必要依据对应方法開展有效的方法验证，依据验证完毕的检测方法对其开展微生物鉴定[1]。由此可见，对微生物鉴定技术在药品生产中运用开展研究，有着十分重要的现实意义。

1 微生物鉴定技术

1.1 PCR技术

PCR是一项体外快速扩增特定DNA片段的技术。PCR技术自上世纪80年代被美国生物化学家穆里斯发明以来已经在医疗卫生、现代农业、食品加工等诸多行业领域得到广泛推广。该项技术的运行原理在于在体外将引物及目标DNA经由变性、退火、延伸等流程达成对目标DNA的快速、特异性扩增[2]。Taq DNA聚合酶的诞生很大程度上推动了PCR技术的发展进步。在实际工作中，PCR技术往往被应用于与核酸测序技术开展有效相融，以实现对微生物基因型的鉴定。16s rDNA可呈现微生物特有的进化信息，在微生物中呈现出广泛的序列多态性以及保守性，其基因序列己然转变成微生物鉴定的一项有力依据。现阶段，由PCR技术衍生的各式各样相关技术，诸如不对称PCR技术、引物标记PCR技术、多重PCR技术等，己在微生物分型及检测领域得到广泛推广。

1.2 基因芯片技术

基因芯片，亦可称之为生物芯片、DNA芯片，其运行机制在于核酸经由与己知序列的、在基片表面固定标记过的核酸探针杂交，进而开展核苷酸测序的方法。该项技术是1998年自然科学领域的重要进展之一，现阶段己在诸多行业领域得到广泛推广，诸如药物筛选、微生物检测、临床诊断等。基因芯片具备较强的自动化、并行性以及微型化，可同时于一张芯片上开展不同微生物的快速检测。基因芯片技术拥有良好的灵敏性、特异性，并且还可缩减化学试剂的使用量，属于一项环境友好型的技术。作为一项快速、准确、大规模的微生物鉴定技术，基因芯片技术尚未广泛转化成商品化产品应用。基因芯片技术所需运用到的诸如寡核苷酸合成仪、扫描仪等设备成本昂贵，并且对基因芯片检测结果评定现阶段尚未有构建起全面统一的标准，样品制备难度大也一定程度上制约了基因芯片技术的广泛推广。伴随微生物鉴定技术的不断发展成熟，微生物基因库越来越丰富，基因芯片技术在药品微生物鉴定领域势必能够得到越来越广泛的推广。

2 微生物鉴定技术在药品生产中运用

药品生产中安全问题是一项十分重要的问题，其主要涉及到质量、成分营养性及依赖性等方面的问题，本次研究侧重于研究质量安全。近年来，不论是在国际还是在国内不断发生有药品安全问题，由此使得药品安全越来越为医学领域及生产领域所广泛关注。需要注意的是，药品中微生物的鉴定可视作药品质量安全的一项重要权衡标准，也可将其作为鉴定的一项重要参考依据，所以要对药品中各式各样微生物开展高水平的鉴定，微生物相关鉴定技术在当前药品生产中的运用，包括有：

2.1 PCR技术在药品生产中运用

PCR技术依托体外多聚酶链反应合成特异性DNA片段，然后经由扩增产物，使DNA迅猛增长，数量可骤升至原本的百倍，再对荧光条带进行检测，进而实现对微生物种类的确定。PCR技术既具备较高灵敏度、较强的特异性以及快速检测等特征，自理论层面而言，在检测细菌过程中，运用PCR技术可检测出一个细菌的拷贝基因，进一步在短暂时间内增菌或不增菌，在细菌检测中极大水平缩减时间投入，可定量鉴定出大肠杆菌、沙门杆菌、肉毒杆菌等，极大水平扩大检测范围。同时，PCR技术还可鉴定出药品中含有治疗金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、李斯特杆菌等多种不同成分。举例而言，相关研究人员在尚未开展富集化培养便引入免疫磁珠方法、荧光定量PCR技术开展有效相融，实现了对药品的快速准确检测，鉴定出药品中含有治疗李斯特菌、大肠埃希氏菌等成分：还有相关研究人员运用荧光定量PCR技术对实验菌株展开检测，发现药品中大部分菌株呈阴性，且含有少部分溶血弧菌呈阳性[3]。值得一提的是，PCR技术同样存在一些缺点，好比因为增菌培养基或其他相关微生物DNA会对水生栖热菌产生一定抑制作用，进一步导致鉴定结果呈假阴性，对结果带来不利影响。

2.2 基因芯片技术在药品生产中运用

基因芯片技术是指利用微电子技术及微加工技术，将一大批基因寡核苷酸开展高密度、有序排列，并使其排列于硅片、纤维膜等载体上，进一步形成杂交信号对目的基因予以检测。运用基因芯片技术对样品DNA依托PCR技术扩增后制备的探针点样于基因芯片表面，通过荧光标记的寡核苷酸点及芯片表面探针开展杂交，再选取扫描仪对芯片上呈现的荧光予以检测分析，进一步鉴定出样品DNA中含有相关特定微生物与否。基因芯片技术还可于寡核苷酸探针中加入一定探针，进而使检测范围得到有效扩大，并且经由加入及调节探针，使基因芯片检测准确性得到显著提升。自理论层面而言，运用基因芯片技术可于一次试验中有限检测出所有潜在的致病原，或于一张基因芯片中检测出一种致病原的遗传学指标，极大水平提高基因芯片技术的检测速度、便捷性及灵敏度，弥补传统检测中操作复杂、效率低及自动化水平低等不足。

3 药品生产中的微生物污染控制策略

新形势下，药品生产行业要紧紧跟随社会前进脚步，加大改革创新力度，加强对国内外成功发展经验的学习引入，切实开展好对药品生产中的微生物污染控制工作。如何进一步促进药品生产的安全有序开展可以将以下策略作为切入点：其一，开展好药品生产原料控制。对买入的药品生产原料开展严格验收检测，保证达标的原料投入生产。进厂的生产原料应当首先对包装情况开展检测，确保外包装完好，各项标签记录完整，依据质量标准开展染菌情况检测。同时，还应当开闸好物料储存保管工作，运用达标的原材料，结合各种剂型实际要求，药品生产前对原材料开展筛选、清洗、灭菌等处理。直接入药的药材在配料前鉴定微生物满足标准与否，确保成品卫生学指标达标，对直接入药含菌量高的中药材依据其特性逐一开展灭菌处理。制剂包装对确保制剂质量至关重要，应当提高重视，要满足药品监管部门相关规定，防止包装材料在储存、运输等环节遭受污染，倘若包装材料污染细菌不满足标准，则应当开展灭菌处理方可投入使用。其二，确保生产用水质量。生产用水应当严格依据国家标准开展控制，例如控制好制粒过程中运用的粘合液，应当运用经高温煮沸杀菌处理的纯水，应当运用流动水对药材进行洗涤，运用完毕的水不可再用于洗涤其他药材。适时对生产用水质量进行检测，加大对纯化水防污染管理力度，保证储藏、输送纯化水容器及管道材质的稳定性，应当运用可靠的不锈钢材质，缩减管线死角，定期对输送管道、容器进行消毒处理。最后，适时依据国家标准对纯化水、自来水开展质量控制。其三，加大对环境与设备的有效管理。构建科学健全的管理制度，确保洁净区个环境指标达标，并按照规定进行灭菌、使用、维护、保养等，并进行详细记录。药品生产设备应当结合生产工艺要求及生产规模而定，只要与产品直接接触的设备，便应当确保设备内表面光滑无死角。各个生产环节尽可能缩减微生物污染，应适时清洗、消毒。药品生产前应当检测容器、设备、输送药液洁净与否或者是否需要消毒，否则不可开展新产品生产。

4 结束语

总而言之，在药品生产中，对原料、生产场所、生产过程的微生物控制是确保药品质量的重要前提，因而运用微生物鉴定技术高效、准确地获取检测结果，对现阶段药品微生物检测工作而言至关重要。新形势下，药品生产行业相关人员应当加大研究力度，提高对微生物鉴定技术内涵特征的有效认识，推进对微生物鉴定技术的科学合理应用，“开展好药品生产原料控制”、“确保生产用水质量”、“加大对环境与设备的有效管理”等，积极促进药品生产的安全有序开展。

参考文献

[1]池王胄，宋庭，周芳芳，孙黎，微生物鉴定技术在无菌药品生产企业中的应用[J].中国医药导刊，2012，14 （01）：177-178， 180.

[2]郑小玲，王知坚，李珏，王征南，洪利娅，多种测序技术在药品检测环境微生物鉴定分析中的应用研究[J].药物分析杂志，2016，27 （01）： 46-52.

[3] HERBEL S R， LAUZAT B， VONNICKISCH-ROSENEGK M. et al.Species-specific quantification ofprobiotic lactobacilli in yoghurtby quantitative real-time PCR[J].JApplMicrobiol，2013， 115 （06）： 1402-1410。