马立克病病毒miR-M4-5p宿主靶基因cDNA文库的构建及鉴定

薛正飞，滕 蔓，李会珍，马圣明,3，宋利娜，张 雅，罗 俊,3，张改平*

(1. 河南农业大学，生命科学学院，郑州 450002； 2. 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，农业部动物免疫学重点实验室，河南省动物免疫学重点实验室，郑州 450002；3. 河南科技大学，动物科技学院，动物疫病与公共安全重点实验室，洛阳 471003)

马立克病(Marek’s disease,MD)是由马立克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)感染鸡引起的一种肿瘤性免疫抑制性传染病[1]。MDV属于疱疹病毒科,α-疱疹病毒亚科,马立克病毒属。依据生物学特性的不同,MDV可分为血清1型(MDV-1)、血清2型(MDV-2)和血清3型(HVT)三种血清型[2],而在最新的病毒分类中又被重新命名为禽疱疹病毒2型(GaHV2)、禽疱疹病毒3型(GaHV3)和火鸡疱疹病毒Ⅰ型(MeHV1)[3]。其中,仅MDV-1具有致病性和致瘤性。目前,虽然可以用疫苗较好地预防MD肿瘤发生,但由于疫苗免疫压力及病毒自身进化等原因,MDV流行毒株的毒力正不断增强[4]。MDV感染鸡群后不仅导致宿主免疫抑制,而且可快速诱发肿瘤及大批鸡死亡,因此MDV感染被认为是研究疱疹病毒致病和致肿瘤的理想模型[5]。

microRNA(miRNA)是一类长度为21～25 nt的非编码小分子RNA,它们在细胞的发育与分化、细胞凋亡、肿瘤发生等许多生物学过程中调控蛋白编码基因的转录后表达水平[6-7]。 MDV-1共编码26个成熟体miRNA,其中miR-M4-5p与宿主miR-155具有相同的种子序列,是miR-155的同源物[8]。由于miR-155参与调控许多肿瘤的形成过程,被认为是致癌基因[9-13],miR-M4-5p可能也发挥着类似的重要作用。最近的研究表明miR-M4-5p在MDV致瘤性方面直接发挥着重要作用。敲除miR-M4-5p的MDV致病和致瘤能力显著减弱[14]，但具体的作用机制仍然不是十分清楚。……