猪肺炎支原体不同毒力菌株对猪气管上皮3D细胞的损伤差异与机制分析

冯艳艳，王海燕，刘蓓蓓，韦艳娜，张珍珍，白 昀，倪 博，邵国青，雷治海，冯志新*

(1. 南京农业大学动物医学院，南京 210095；2. 江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，南京210014)

猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumonia of swine，MPS)是由猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae，Mhp)引起的一种慢性接触性呼吸道病。MPS世界性流行，发病率高，并常诱发其他病原的感染引起死亡，给现代养猪业造成巨大损失[1]。研究发现，Mhp对猪气管上皮细胞表面纤毛的黏附作用是侵袭宿主呼吸道的关键步骤，决定了支原体的致病性[2-3]，因此众多的文献通过猪气管上皮细胞(swine tracheal epithelial cells，STEC)模型探究Mhp的致病机制，但传统STEC都是通过浸没培养，无论是传代的细胞系还是原代分离的细胞均只能单层生长，无法分化形成原代细胞在体内生长条件下的假复层纤毛柱状上皮形状和功能[4]；因此，建立一种尽可能接近体内生长方式的细胞培养模型以研究Mhp的感染及与宿主互作关系尤为重要。

近年来有学者利用气液交界面(air-liquid interface，ALI)培养模型研究人呼吸道上皮抗感染防御机制已取得重大突破[5-7]，本研究借鉴人呼吸道上皮细胞ALI培养技术经验，建立及优化猪气管上皮传代细胞系的3D培养模型，分别将不同毒力的Mhp菌株感染猪气管上皮细胞，从细胞生长特性、活性和功能等方面比较Mhp强弱毒株的损伤差异及可能机制，为深入探究Mhp的致病机制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

RPMI-1640购自维森特生物技术有限公司，血清购自Gbico公司；人胎盘胶原Ⅳ购自Sigma公司；LPS购自Sigma公司；……