miR-489通过打靶PAK5抑制黑色素瘤的迁移

郭冰玉，回蔷，常鹏，陶凯

（沈阳军区总医院整形外科，沈阳 110840）

黑色素瘤是较为常见的皮肤肿瘤，虽然早期发现可以通过手术的方法进行治疗，但是黑色素瘤极易发生转移，通常发现时就已经累及多个器官，一旦发生转移患者预后极差［1-4］。

PAK5是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的成员之一，在胰腺癌、胃癌、肠癌、乳腺癌等多种肿瘤中发挥重要作用，在黑色素瘤中也有一定的促癌作用［5］。miR-489在诸如膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌等多种肿瘤中都被发现具有低表达的现象，体外实验［6-8］证实其可以在一定程度上抑制肿瘤细胞的生长和迁移能力，但是在黑色素瘤中鲜有报道。

本研究拟探讨miR-489通过打靶PAK5来抑制黑色素瘤的迁移功能的方式，旨在为黑色素瘤的治疗提供新的靶点。

1 材料与方法

1.1 材料

人黑色素瘤细胞系A375 （我科实验室冻存） ，DMEM培养基 （美国HyClone公司） ，胎牛血清 （天津市灏洋生物制品科技有限责任公司） ，miR-489 拟似物 （CATGAGGGCAGAAACCGATGCAA） ，miR-489抑制物 （GTTGCATCGGTTTCTGCCCTCATG） （广州锐博生物科技有限公司），台盼蓝 （上海碧云天生物技术有限公司） 。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养：使用含10 %胎牛血清的DMEM培养基培养人黑色素瘤细胞A375，置于37 ℃ 5%CO2培养箱中。

1.2.2 荧光素酶报告基因：在使用lipo2000转染PAK5 WT和PAK5 MUT （突变PAK5与miR-489的结合位点） 后，分别将空白对照、miR-489和miR-489的反义链转染到细胞中。实验所有质粒购自上海吉玛制药有限公司。转染24 h后使用荧光素酶报告基因实验测得荧光值。

1.2.3 Transwell实验：将对数生长期细胞以1×105/孔的密度接种于Transwell小室中，终体积200 μ L，下室加入600 μ L无血清培养基，12 h后更换培养基，将细胞共分3组，分别为空白对照组，miR-489拟似物组和miR-489抑制物组，每组设3个复孔。……