青海牦牛牛病毒性腹泻的血清学调查

朱 玲 青海省祁连县野牛沟乡畜牧兽医站 810499

牛病毒性腹泻（Bovine viral diarrhea，BVD）是由牛病毒性腹泻病毒 （Bovine viral diarrhea virus，BVDV）引起牛的一种急性、热性传染病[1]，牛感染BVDV后主要表现为腹泻，进行性消瘦，脱水，严重的可引起死亡[2]。BVDV可以导致免疫耐受和免疫抑制，母畜流产和奶牛产奶量下降，以及生产性能下降，每年都给全球养牛业造成巨大的经济损失[3-4]。近几年来，我国BVDV的感染情况日益严重，为了掌握青海牦牛BVDV的感染情况，为青海牦牛BVDV的综合防控提供参考依据，本研究对采集于青海省6个规模牦牛饲养场和11户散养户的559份血清样品进行了ELISA抗体检测。现将整个试验过程介绍如下。

1 材料和方法

（1）血清样品来源。2017年3～12月，采集于青海省6个规模牦牛饲养场和11户散养户的血清样品共计559份。

（2）试剂与仪器。牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒为美国IDEXX公司产品；ELx800酶标仪为美国BIOtek公司产品。

（3）检测方法。按照牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书操作，首先在96孔酶标板每个孔加入100μL样品稀释液，之后在检测孔加入25μL血清样品，在阳性对照孔和阴性对照孔中各加入25μL阳性和阴性对照血清，加完后在室温下作用90分钟，之后弃去酶标板液体，每孔加入300μL洗液洗5次，最后一次洗完拍干。在每个酶标孔加入100μL酶标抗体，室温下作用30分钟，之后弃去酶标板液体，每孔加入300μL洗液洗5次，最后一次洗完拍干。每孔加入100μL TMB底物，室温下避光10分钟H欧诺个显色，之后每孔加入100μL终止液终止反应，酶标仪在450nm波长读数，记录分析检测结果。

（4）结果判定。……