基于DNA条形码技术的防风药材市场调查研究

罗丹丹，方海兰，李 杨，段宝忠

（大理大学药学与化学学院，云南大理 671000）

防风为常用中药，来源于伞形科防风属植物防风 Saposhnikovia divaricata（Turcz.）Schischk.的根，具有祛风解表，胜湿止痛，止痉功效〔1〕。各地常将川防风Ligusticum brachylobum Franch.、竹叶防风Seseli mairei H.Wolff、松叶防风S.yunnanense Franch.以及同科多种植物如杏叶防风Pimpinella candolleana Wight&Arn.、石 防 风 Peucedanum terebinthaceum（Fisch.ex Trevir.）Ledeb.、葛缕子 Carum carvi L.等作为防风混伪品使用〔2-5〕，由于这些药材均来源于伞形科，其根部特征与防风较为相似，采用传统的性状和显微鉴别等方法难以鉴别〔6-8〕，对临床用药安全造成极大威胁。

DNA条形码（DNA barcoding）技术是分子鉴定的最新发展，即通过比较一段通用DNA片段，对物种进行快速、准确的识别和鉴定〔9〕。陈士林等对大量样本的研究表明，ITS2序列是鉴定药用植物及其混伪品的理想条形码〔10〕。该技术已广泛用于重楼〔11〕、臭牡丹〔12〕、艾叶〔13〕、何首乌〔14〕等多种中药材的混伪品鉴别研究，并取得了良好的效果。目前已有学者采用ITS2条形码对防风及其伪品中华前胡和杏叶防风等开展了鉴别研究，结果表明DNA条形码技术可有效鉴别防风及其混伪品〔15〕，但未见该技术用于竹叶防风、松叶防风等常见伪品的分子鉴别研究。鉴于此，本研究在建立防风及其常见混伪品的参照DNA条形码数据库的基础上，对来源于市场的28批标签为防风的药材进行了研究，以期为DNA条形码技术在药品检验和市场监管领域的应用提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器PCR仪（2720，Applied Biosystems，USA）；1-14K型高速冷冻离心机（Sigma公司）；植物组织研磨仪（Retsch MM400）；NanoDrop 2000∕2000C分光光度计（Thermo Fisher Scientific公司）；各种量程的微量移液器（Eppendorf）。

1.2 材料本研究采集包括防风Saposhnikovia divaricata、竹叶防风Seseli mairei、杏……