免疫多糖在鲫鱼鳃出血防治中的应用

王中清，厉成新，魏建中，王礼虎，祭中石，张 琪

（上海市海丰水产养殖有限公司，上海 224153）

当前水产养殖业已成为朝阳产业，世界各国都越来越重视渔业的发展，并逐渐成为支柱产业之一。但是发展的同时水产养殖也面临严峻挑战，随着水产养殖集约化程度的不断提高，养殖密度的增加，养殖环境的恶化，病害暴发呈逐年上升趋势，新的流行性病害种类不断出现，尤其是难以治愈的病毒性疾病，给水产养殖生产造成巨大损失。

江苏沿海地区大丰是全国鲫鱼的主养地，多年来一直取得不错的经济效益。然而随着病毒性疾病鳃出血的出现，已严重制约了鲫鱼养殖业的发展，截至2016年苏北地区已有80%的塘口不同程度暴发鳃出血病。抗生素类药物虽然能达到一定控制细菌性疾病的作用，但对免疫系统低下及病毒性疾病的防治效果较差，使水产养殖业长远发展受到极大威胁。在确保水产品安全与品质的前提下，健康养殖已成为人们瞩目的焦点。

预防动物疫病应从养殖过程入手，防重于治，提高水产动物自身免疫力，增强抗病力是促进健康养殖的有效途径。研究发现微生物多糖具有提高动物自身免疫力，增强自身对细菌、真菌、病毒及寄生虫的抵抗力，减少不良应激，提高动物生产性能等作用。酵母细胞壁多糖是目前研究和应用比较多的一种真菌免疫多糖，本实验通过投喂酵母细胞壁多糖，观察其对鲫鱼鳃出血病的防治效果，以期为鲫鱼鳃出血病的防治提供基础。

1 材料

1.1 试验用鱼

选取鱼种来源一致，放养规格一致，饲料厂家一致无异常现象出现的两个实验塘口用作血清免疫指标测定实验。

1.2 实验用菌株

用于本研究的攻毒的嗜水气单胞菌分离自患病鲫鱼经鉴定并保存。

2 方法

2.1 饲料的投喂

将商品饲料在投喂前按照每吨添加4kg的酵母细胞壁多糖，另外一口塘投喂等量的商品饲料。在鲫鱼鳃出血爆发前的4月上旬与8月下旬连续不间断投喂4周。

2.2 菌液培养

将保存在-20℃的嗜水气单胞菌菌种进行活化培养，在固体培养基上进行划线37℃培养18h。挑取单菌落接种到200mL的液体培养基中，150rpm培养12h的条件下进行扩大培养。

2.3 胸腔注射方法对试验鱼进行攻毒试验

饲喂结束后10d随机抽取20尾鲫鱼用作嗜水气单胞菌攻毒试验，对照组为同等规格未投喂酵母多糖的鲫鱼。

死亡率 (%)=［(试验初鱼体尾数－试验末鱼体尾数)/试验初鱼体尾数］×100

免疫保护率(%)=(1－试验组死亡率/对照组死亡率)×100。

2.4 免疫指标的测定

在饲喂前1周，饲喂第1周，饲喂第2周，饲喂第3周，饲喂第4周，饲喂后1周6个时间段的实验鲫鱼各5条，抽血测定各时间段碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶的活性。

3 结果

3.1 攻毒感染结果

攻毒后各组的感染死亡结果如表1，经过观察鲫鱼的症状为比较明显的出血病症状。

表1 嗜水气单胞菌攻毒后各组的免疫保护情况（尾 %）

3.2 免疫指标的测定

免疫后投喂酵母多糖的鲫鱼血清超氧化物歧化酶活性检测结果显示：血清中AKP与SOD活性在投喂拜克后均显著下降，停喂后均有升高，但是实验组与对照组相比，AKP无显著差异(P＞0.05)，SOD显著差异(P＜0.05)。投喂酵母后，AKP与SOD均在第2周达到顶峰，之后缓慢下降至初期水平。

3.3 鳃出血发病率与发病程度

表2 鳃出血发病塘口数与干塘数

由表2可知，在整体自养养殖塘口数相差不大的情况下，不管是鲫鱼精养还是混养模式，公司2017年度鲫鱼鳃出血整体发病率远低于2016年，且发病程度及发病后干塘率也远远低于去年。横向对比也明显优于周边养殖户对鲫鱼鳃出血的防治效果。

4 讨论

采用免疫多糖作为免疫添加剂，可以有效地激活鱼体免疫反应，提高鱼类的抗病力，达到预防并减少疾病发生的目的。王庆奎等采用口服的方式用当归多糖对点带石斑鱼进行免疫，攻毒结果表明投喂当归多糖可以降低点带石斑鱼的死亡率。本实验结果显示添加酵母细胞壁多糖组的感染率和发病程度要明显低于未添加酵母细胞壁多糖组，这与王庆奎的研究结果基本相似。此外，扩大酵母细胞壁多糖应用塘口取得的成果显示，从养殖过程入手，通过投喂酵母细胞壁多糖提高水产动物自身免疫力，是水产养殖动物免疫系统低下和抗生素治疗病毒类疾病无效情况下的有效预防途径。

碱性磷酸酶（AKP）广泛存在于各种动物体内，它在免疫反应中发挥作用。超氧化物歧化酶是鱼类清除机体自由基的重要物质，SOD与生物的免疫有密切关系。张伟妮等认为，在饲料中添加黄芪多糖可以不同程度地提高罗非鱼血清中碱性磷酸酶的活性和超氧化物歧化酶的活性。庞素风等将云芝免疫活性多糖添加到银鲫的饲料中，血清超氧化物歧化酶活性显示明显上升。本试验结果显示超氧化物歧化酶的活性变化与上述的研究基本一致，但是碱性磷酸酶的活性变化有所差异，分析原因可能是鱼类不同以及免疫多糖的来源不同造成的差异。

5 小结

投喂酵母细胞壁多糖后AKP与SOD活力指标明显升高，非特异性免疫力得到改善与提高，更易抵抗环境刺激和病原侵袭。酵母细胞壁多糖可以增强鲫鱼对嗜水气单胞菌的抵抗能力，提高鲫鱼在细菌感染状态下的存活率。酵母细胞壁多糖可特异地及非特异地提高机体的免疫功能，加强抗病毒能力，具有其它防治方法无法比拟的功效。

[1]王庆奎.当归多糖对点带石斑鱼非特异性免疫力的影响[D].中国海洋大学,2012.

[2]孙静秋,等.凡纳滨对虾体内ACP、AKP酶的细胞化学定位[J].复旦学报∶自然科学版,2007,46(6)∶947－951.