转录因子DLX4与EMT相关蛋白在乳腺癌中表达与意义研究

柳苏玲

【中图分类号】R737 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2018）02-0-01

对于女性群体来说，乳腺癌是非常常见的一种危害极大的恶性肿瘤，乳腺癌居女性恶性肿瘤发病中发病率非常高的位置，导致女性身心健康受到严重的影响，甚至严重的危及到患者的生命。癌基因是转录因子DLX4最明显的特征，上皮细胞间质转化EMT相关蛋白主要包括两个，第一个是E-cadherin，第二个是vimentin，其主要与以下两个因素相关：乳腺癌侵袭和乳腺癌转移。本次研究收集乳腺癌以及对应癌旁组织标本各200件作为分析主体，分析在乳腺癌组织中转录因子 DLX4 与 EMT 相关蛋白的表达以及意义。详细如下所示：

1 资料选择以及方法

1.1 资料选择 选取2015年1月到2017年12月期间，选择各200例乳腺浸润性导管癌标本（100例乳腺癌以及100例癌旁组织标本）作为分析主体，分析其病理分级情况得到：有68例Ⅰ级例数；有92例Ⅱ级例数；有40例Ⅲ级例数。

1.2 纳入标准 都需要进行病理学专家确诊，确诊之后结果为乳腺浸润性导管癌或者是癌旁组织；均没有接受过经放治疗以及化疗治疗；

存在完整的患者随访资料以及数据。

1.3 试剂的准备 自北京中杉金桥公司购SP法进行免疫组化，严格按试剂盒说明书完成具体操作步骤[1]。在Santa Cruz公司购取以下试剂：鼠抗单克隆抗体β-actin试剂、羊抗单克隆抗体DLX4试剂。在北京中杉金桥公司购取以下试剂：兔抗单克隆抗体vimentin试剂、鼠抗单克隆抗体E-cadherin试剂。在ATCC细胞库购取以下细胞：乳腺癌细胞系MDA-MD-231。使用SP法进行免疫组化的情况：完成脱蜡水化以及抗原修复，完成一抗的滴加，保持温度为4℃，储存过夜，进行有效的PBS洗涤操作，进而完成二抗的滴加，进行PBS洗涤，使用DAB完成显色工作，在完成苏木精复染之后则使用双蒸水进行洗涤，之后进行进一步的脱水工作、透明工作以及封固工作。

1.4 方法

1.4.1 乳腺癌細胞系 MDA-MD-231 细胞的培养 在完成细胞收集之后，完成裂解液的添加，实现蛋白的添加，添加样缓冲液，对其混合混匀，之后煮沸，转性处理，在室温进行静置，在完全冷却之后，需要将其置放于零下20℃的环境下进行存备使用。之后分离使用10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，实现硝酸纤维素（NC）膜的转移，之后使用5%脱脂牛奶进行一个小时的封闭处理，并且分别加入以下试剂：1∶2 000比例的鼠抗β-actin单克隆抗体试剂；1∶1 000比例的兔抗vimentin试剂；1∶1 000比例的鼠抗E-cadherin试剂；1∶500比例的羊抗DLX4试剂。之后将其处于4℃的环境下，需过夜，在第二天，完成三次的洗膜处理，添加1∶2 000比例的二抗HRP，将其处于37℃的环境下完成两个小时的反应，之后完成三次的洗膜处理，之后进行NBT/BCIP显色处理，对其进行水洗，完成反应的终止。使用图像处理仪完成扫描工作，半定量分析使用的是Image J软件。

1.4.2 免疫组化 使用免疫组化SP法染色。vimentin于胞质表达。DLX4阳性信号主要指的是棕黄色信号或者是棕褐色信号，于细胞膜表达。E-cadherin阳性信号主要指的是棕黄色信号，于细胞膜表达[2]。

2 结果

2.1 DLX4、E-cadherin以及vimentin在乳腺癌和癌旁组织中的表达

分析得到：乳腺癌组织的DLX4的表达、vimentin的表达的阳性率均高于癌旁组织；同时，E-cadherin的表达低于癌旁组织的阳性率表达。

2.2 DLX4、E-cadherin的表达、vimen-tin 在乳腺癌细胞系中的表达

检测乳腺癌细胞选择使用Western blot检测方法，在完成检测之后得到以下的结果：

选择的是乳腺癌细胞系，分析DLX4在MDA-MD-231细胞的表达情况，DLX4在该细胞的中为高表达，而在MDA-MD-231细胞中E-cadherin得到的结果是低表达，而vimentin则呈现一个高表达的结果。

3 结论

EMT具有非常显著的特征，那就是E-cadherin（上皮性标志物）表达下调，同时还存在vimentin（充质蛋白）Fibronectin（充质蛋白）表达升高的情况。然而，EMT具有的最为主要的一个特征就是降低的E-cadherin表达结果，并且还存在vimentin表达结果升高的情况[3]。

在完成本次研究之后发现，在乳腺癌组织中，DLX4的结果是高表达的情况，如果是在高侵袭性的癌细胞系中则结果为高表达，如果是在低侵袭性癌细胞系中结果则是低表达。综上所述，转录因子DLX4跟E-cadherin在乳腺浸润性导管癌中的表达结果为两者之间负相关，同时DLX4跟vimentin表达之间则结果为正相关，所以，上述提到的DLX4、E-cadherin、vimentin之间或存在一种调控的关系，这是促使腺癌实现局部侵袭的主要原因，同时也是导致出现远处转移的主要原因。

参考文献

王鲁英，王永红，叶琼，王秋颖.乳腺癌患者中转录因子特化蛋白1和血管内皮生长因子的表达及临床意义[J].实用癌症杂志，2017，32（10）：1580-1583.