苦味酸速率法和酶法测定血清肌酐方法学评价

秦连英　巩文平

【中图分类号】R466.11 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2018）02-0-02

肾脏疾病是严重危害人类健康的疾病之一，据估计，目前全世界肾病患者人数超过6亿，每年死于慢性肾病相关疾病的患者人数超过100万，且肾病患病率还在不断上升。肌酐检测是肾功能检测的一个重要指标。血中肌酐的浓度能准确地反映肾小球的功能。它的检测结果对肾脏患者的临床诊断、疗效观察及预后判断有很重要的意义。测定血清肌酐最重要的两种方法是酶法和苦味酸法。这两种方法因为测定原理不同，抗干扰能力不同，导致两种检测结果有差异。但具体两种方法各有什么优缺点，笔者采用Cobas C 501全 自动生化分析仪用两种方法对50例临床患者进行对照测定，并对结果进行统计学分析，为实验室选择适合的检测方法提供依据。了解酶法与苦味酸速率法测定血清肌酐的优缺点，为检验科选用检测方法提供参考依据。

血清中肌酐的测定是诊断和监测肾功能损伤与疗效观察的一项重要生化指标，由于苦味酸法容易被内源性物质干扰，特异性差，故通常采用Trinder反应（偶联终点比色法）为指示系统的肌酐酶偶联肌氨酸氧化酶法、肌酐亚胺水解酶偶联谷氨酸脱氢酶法来测定血清肌酐，但在临床检测中往往会遇到部分血清标本肌酐结果假性升高或下降，与尿素氮结果不匹配的情况。因此现结合临床实际对影响酶法测定的因素进行分析。

在碱性苦味酸速率法测定肌酐时胆红素干扰清除剂高铁氰化钾的量对测定结果有一定影响，试剂中加入高铁氰化钾后，标准液的反应速率有下降趋势。血清标本反应速率在加入高铁氰化钾浓度较低时有下降，但下降比率远较标准液为小，而加入浓度较高时反应速率有明显升高、总的效果是加入高铁氰化钾后使肌酐测定结果升高，且随高铁氰化钾浓度的加高而加高。不同厂家的标准液则反应速率变化的规律又略有差异。

1 材料与方法：

1.1 对象：我院康复科患者共50例，其中男23例，女27例，年龄32～70岁。全部测试为空腹状态。

1.2 测试仪器：Cobas C 501全 自动生化分析仪

1.3 测试试剂： 酶法和苦味酸法所用试剂、定标液，质控品均为罗氏诊断产品（上海）有限公司试剂。

1.4 测试方法：由医务人员于清晨7点抽取空腹静脉血3ml，在2小时内分别用两种方法测定血清肌酐浓度。同时按美国临床实验室标准化委员会 EP9-A文件方案，将测定结果进行相关回归分析，计算两种方法间的偏倚。每天选取10份临床患者血液标本加一份质控品，并分别用两种方法 进行测定，每份重复做两遍，共测定5天，记录结果。

1.5 统计学方法：用spss14.1统计学软件进行统计学分析。

2 结果

两种方法测定50份标本的肌酐浓度，苦味酸法肌酐浓度为39～102umol/l，平均为（62+-7.12）umol：；酶法测定的血清肌酐为45～110umol， 平均为（70+-7.53）umol。并且从测定的50份标本的肌酐浓度结果来看，方法内和方法间重复测定值离群点的检验，未发现有超出质控范围 数据，且酶法和苦味酸法相关系数R=0.998， 回 归方程为Y=0.921X+7.963。由此 回归方程，对两种方法检测血清肌酐的结果进行预期偏倚和相对偏倚的估计，发现随着标本肌酐浓度的升高偏倚增大。建议苦味酸法测实验室标本，当肌酐浓度大于300umol /l时，酌情稀释结果会更准确，否则结果偏低。两种方法测定肌酐的精密度、准确度均符合要求，而且两种方法测定结果有良好的相关性，但是酶法与苦味酸速率法比较，线性范围更宽，精密度、准确度、灵敏度也更高，特异性即抗干扰力也更强。

3 讨论

肌酐是肌酸代谢的终产物，在机体正常状态下，它的产生和排泄都较稳定。苦味酸法是比较经典的一种检测方法，但它的不足之处是特异性差，血中丙酮，丙酮酸，叶酸，抗坏血酸，葡萄糖，乙酰乙酸等都可能在此反应中呈色，因此被称为“非肌酐色源”。用血清作样品测定时此类物质可占到发色强度的百分之二十。此外，一些头孢类药物也可与苦味酸反应显色引起干扰。综上原因，随着医学检验技术的进步，目前大多数医院采用肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐。它的优点是特异性强，准确度高，受干扰的物质少，但试剂价格相对较贵。苦味酸法价格便宜，但笔者多年的检验工作经验来看，苦味酸法也有很多的局限性，它的稳定性不够，因为有较重的着色，对比色杯的污染不容忽视。苦味酸对仪器管道也有一定的腐蚀作用。再一个就是苦味酸法受到诸多干扰物的干扰，尤其是胆红素和血红蛋白，造成肌酐检测结果偏低。各医院检验科根据实际情况选用检测方法。有条件的大医院建议用酶法，一些基层医院考虑成本问题，也可用苦味酸法。用酶法测定血清肌酐比苦味酸法更可靠，虽然价格相对较高，但为了给病人提供更准确的检验结果，建议各医院检验科还是选用酶法。

由于本次研究样本量少，研究时间短，结果又一定的局限性。建议采用大样品，多中心研究，期待与各位同仁作进一步的深度分析和探索。

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