禽用活疫苗外源病毒污染情况的调查研究

2018-05-14 03:10侯力丹李启红黄小洁李俊平杨承槐
中国兽药杂志 2018年4期
关键词:腺病毒外源活疫苗

刘 丹,侯力丹 ,李启红,黄小洁,李俊平,杨承槐

(中国兽医药品监察所,北京 100081)

兽用疫苗的安全性一直是企业、养殖户和监管部门非常重视的问题。由于疫苗的生产原材料如组织、细胞、血清等大多来源于动物,因此疫苗产品存在外源病毒污染的风险[1-3]。污染了外源病毒的疫苗不仅不能预防和控制疾病,反而造成疾病爆发和扩散,对人和养殖业造成巨大危害,所以实施系统性的检测和采取严格的预防措施可以有效降低外源病毒污染的风险。

近年来发生的禽用活毒疫苗污染事件,以禽白血病病毒(Avian leucosis virus,ALV)[4-5]、网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)[6-7]和鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CAV)[8-9]较为常见。如果禽用活疫苗混有ALV、REV和CAV等外源病毒,在使用污染的疫苗时会加剧该疫病的传播,并且这些疾病可引起免疫抑制、免疫失败或直接导致免疫动物发病,影响正常疫苗免疫效果[10]。

进行禽用活疫苗外源病毒污染的检验,对确保疫苗质量和产品安全方面具有重要作用。为对禽用活疫苗污染外源病毒的情况进行摸底调查,试验抽取了18家国内生产企业、7家国外企业生产的禽用活疫苗重点品种,按照《中国兽药典》 2010年版三部外源病毒检验[11]鸡检查法和《禽病活疫苗禽腺病毒污染摸底调查工作方案》对抽检的禽病活疫苗进行了外源病毒污染和禽腺病毒(Group I adenovirus,FAdV-I)污染检验,为更好监控疫苗安全性提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗 共抽检禽用活疫苗8种28批(表1)。

表1 国内外企业抽检的疫苗Tab 1 Vaccines of domestic and foreign enterprises

1.1.2 主要试剂 鸡传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)、禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ReoV)、鸡传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease virus,IBDV)、禽网状内皮组织增生症病毒、禽白血病病毒(A、B亚群和J亚群)、禽脑脊髓炎病毒(Avian encephalomyelitis virus,AEV )、鸡传染性贫血病毒ELISA抗体检测试剂盒均购自IDEXX公司;鸡传染性喉气管炎病毒(Avian infectious laryngotracheitis virus,ILTV)ELISA抗体检测试剂盒、FAdV-I抗体检测试剂盒为Biocheck公司产品;禽A型流感病毒(Avian influenza virus,AIV)(H5、H9亚型)、鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和减蛋综合征病毒(Egg drop syndrome virus,EDSV)的血凝抑制(Hemagglutination inhibition,HI )试验抗原和阳性血清、FAdV-I和鸡马立克氏病病毒( Marek's disease virus,MDV)的琼扩抗原和阳性血清、鸡阴性血清均为中国兽医药品监察所病毒制品检测室保存。

1.2 方法

1.2.1 实验动物准备 自山东斯帕法斯实验动物技术有限公司购入25日龄SPF鸡350只,隔离器中饲养备用。

1.2.2 首免 按照各批疫苗瓶签注明的羽份,每批疫苗至少抽取2瓶,均用生理盐水混合稀释成100 羽份/ mL,各点眼接种31日龄SPF鸡10只,每只0.1 mL(含10羽份),同时肌肉注射接种1 mL(含100羽份),隔离饲养观察14 d。

1.2.3 二免 按首免方法和剂量重复接种1次。隔离饲养观察21 d,记录是否有因注射引起的局部或全身症状和呼吸道症状或死亡情况。

1.2.4 分离血清 观察到期,每只鸡经翅静脉采血1 mL,分离血清-20 ℃保存备用。

1.2.5 ELISA抗体检测 进行IBV、REO、IBDV、REV、ALV(A、B亚群和J亚群)、AEV 、CAV、ILTV和FAdV-I等ELISA抗体检测,依据各ELISA抗体检测试剂盒说明书进行。

1.2.6 琼脂抗体检测 FAdV-I和MDV抗体用琼脂扩散试验检测,按常规方法进行。

1.2.7 HI检测 AIV(H5、H9亚型)、NDV和EDSV抗体用HI试验检测,按常规方法进行。

2 检验结果

抽检的18家国内生产企业、7家国外企业的共28批疫苗,接种SPF鸡后,在35 d临床观察期内均健活;除了本疫苗所产生的特异性抗体外,其他外源病毒抗体检测结果均为阴性;禽腺病毒抗体ELISA抗体和琼脂扩散试验检测均为阴性,表明抽检的疫苗均无外源病毒和禽腺病毒污染,结果见表2和表3。

表2 外源病毒检验结果(ELISA结果)Tab 2 The results of extraneous virus test(ELISA)

续表

鸡病毒性关节炎活疫苗(S1133株)国外企业310/10阴性10/10阴性10/10阴性10/10阴性10/10阴性10/10阴性10/10阴性10/10阴性10/10阴性

表3 外源病毒检验结果(临床观察、HI和AGP结果) Tab 3 The results of extraneous virus test(Clinical observations, HI, and AGP)

鸡传染性法氏囊病复合冻干活疫苗(2512株)国外企业310/10健活10/10阴性10/10阴性10/10阴性10/10阴性10/10阴性10/10阴性

续表

3 讨 论

疫苗的预防接种是目前有效控制家禽疫病的重要手段之一,但由于病毒类制品在毒种选育和生产过程中经常使用动物或细胞培养,因此有可能造成外源病毒的污染。常见的外源病毒污染有REV、ALV和CAV等,这些病毒的共同特点是:既可以水平传播,也可以垂直传播,感染后能引起免疫抑制,没有相应的疫苗防控。 因此,一旦鸡群感染这些病原,将会引起严重的经济损失[12]。为了保证产品质量,需要对毒种、细胞和成品进行外源病毒的检测,我国常用的外源病毒检验方法有鸡胚检查法、细胞检查法和鸡检查法。鸡检查法一般不用,只在用鸡胚检查法进行外源病毒检验无结果或可疑时,用鸡进行检验[11-13]。

除了上述常见的外源病毒污染外,近年来I群禽腺病毒(FAdV-1)疫情爆发,受到农业部高度重视,农业部兽医局下发了《关于开展禽病活疫苗腺病毒污染摸底调查的函》(农医药便[2016]87号),中监所组织相关技术专家制定了禽腺病毒摸底调查方案。我们查阅比较了国内外有关禽病活疫苗禽腺病毒污染控制的方法,发现我国、美国及欧洲对禽病活疫苗成品进行外源病毒检验时均无专门针对I群FAdV检验的方法,《欧洲药典》对基础种毒的外源病毒检验需用鸡检查法,该方法规定需对I群FAdV进行检测。而我国对基础种毒外源病毒的检验未强制使用鸡检查法,且我国目前的鸡检查法中也没有对I群FAdV检测的要求。

《禽病活疫苗禽腺病毒污染摸底调查工作方案》中的检验方法,是借鉴《欧洲药典》2.6.24"6.Test For Extraneous Agents Using Chicks"。即:取2~5周龄的SPF鸡10只,点眼接种10羽份疫苗,肌肉注射100羽份疫苗,2周后,按上述方法和剂量重复接种1次。接种后每天观察SPF鸡状态。第2次接种后21日采血,用琼脂扩散试验方法、ELISA方法或间接免疫荧光方法检测I群FAdV抗体。在接到农业部兽医局开展禽病活疫苗腺病毒污染摸底调查的任务后,制定方案、抽检疫苗、进行禽腺病毒污染检验,同时对所有的疫苗进行了其他外源病毒抗体的检测。试验用的试验动物数量和免疫程序,虽与《中国兽药典》2010年版三部鸡检查法不一致,但由于该方法与《欧洲药典》鸡检查法一致,所以试验的外源病毒检测结果是有效和具有说服力的[14]。

试验抽取了18家国内生产企业、7家国外企业生产的禽用活疫苗重点品种,结果显示所抽检的禽用活疫苗均无外源病毒污染和禽腺病毒污染,表明我国禽用活疫苗的质量控制和安全性良好,这是企业、养殖户和监管部门共同努力的结果。为了保证生物制品安全,所有起始材料和最终产品都必须检测潜在污染物。尽管如此,污染风险还不能完全排除,只是尽可能降低。对于新发现的风险因子并没有具体规定和检测方法,应该采取什么措施才能最大程度地提高安全性值得考虑[15]。对于I群FAdV,中国兽医药品监察所病毒制品检测室也正在建立其污染禽用活疫苗的相关检验方法,以期纳入新版兽药典,规范禽病毒类生物制品外源病毒检验。

参考文献:

[1] Pastoret P P. Human and animal vaccine contaminations[J]. Biologicals,2010,38(3):332-334.

[2] Levings R L,Wilbur L A,Evermann J F,etal. Abortion and death in pregnant bitches associated with a canine vaccine con ̄taminated with bluetongue virus[J]. Developments in Biological Standardization,1996,88(2):219-220.

[3] Dodet B,Hesselink W,Jungback C,etal. Viral safety and extraneous agents testing for veterinary vaccines[J]. Biologicals,2010,38(3):326-331.

[4] Zavala G,Cheng S. Detection and characterization of avian leukosis virus in Marek's disease vaccines[J]. Avian Diseases,2006,50(2):209-215.

[5] Fadly A,Silva R,Hunt H,etal.Isolation and characterization of an adventitious avian leukosis virus isolated from commercial Marek's disease vaccines[J]. Avian Diseases,2006,50(3):380-385.

[6] Awad A M,Abd EI-Hamid H S,Abou Rawash A A,etal. Detection of reticuloendotheliosis virus as a contaminant of fowl pox vaccines[J]. Poultry Science,2010,89(11):2389-2395.

[7] Jing W,Zhong L,Peng Z,etal. Isolation of reticuloendotheliosis virus from a fowlpox live vaccine and env gene sequence analysis[J]. Chinese Journal of Animal Infectious Diseases,2010,18:35-39.

[8] Amer H M,Elzahed H M,Elabiare E A,etal. An optimized polymerase chain reaction assay to identify avian virus vaccine contamination with chicken anemia virus[J]. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation,2011,23(1):34-40.

[9] 邵红霞,王平平,武 敏,等. 家禽活疫苗中鸡传染性贫血病毒PCR检测方法的建立[J]. 中国家禽,2012,21:28-30.

Shao H X,Wang P P, Wu M,etal. A rapid PCR approach for detecting the contamination of chicken avemia vius in avian live vaccine[J]. China Poultry,2012,21:28-30.

[10] 饶明章,袁丽霞,赵子君,等. 浅谈禽用活毒疫苗污染外源病毒问题[J]. 养禽与禽病防治,2016,3:2-8.

Rao M Z,Yuan L X,Zhao Z J,etal. Discussion on the problem of contaminated exogenous virus of avian live vaccine[J]. Poultry Husbandry and Disease Control,2016,3:2-8.

[11] 中国兽药典2010年版三部[S].

Veterinary pharmacopoeia of the People's Republic of China,2010(3)[S].

[12] 李慧姣. 禽用病毒性活疫苗外源病毒污染现状[J]. 中国家禽,2010,32(22):37-38.

Li H J. The exogenous virus pollution status of chicken viral live vaccine[J]. China Poultry , 2010,32(22):37-38.

[13] 庄金秋,梅建国,刘晓倩,等. 部分禽源生物制品外源病毒的检测[J]. 动物医学进展,2011,33(4):121-125.

Zhuang J Q, Mei J G, Liu X Q,etal. Detection of exogenous virus of some poultry source biological products[J]. Progress in Veterinary Medicine, 2011,33(4):121-125.

[14] 欧洲药典 2014年第八版[S].

European pharmacopoeia,2014(8)[S].

[15] 范学政,李 翠,宁宜宝,等. 病毒类制品中外源病毒污染、检测方法与控制措施[J]. 中国兽药杂志,2014,48(11):57-61.

Fan X Z,Li C,Ning Y B,etal. Exogenous virus contamination, detection method and control measures of virus products[J]. Chinese Journal of Veterinary Drug,2014,48(11):57-61.

猜你喜欢
腺病毒外源活疫苗
人腺病毒感染的病原学研究现状
具有外源输入的船舶横摇运动NARX神经网络预测
血清4型Ⅰ群禽腺病毒 Hexon、FierⅠ、FiberⅡ基因的原核表达
新冠病毒灭活疫苗诞生记
外源污染物对硬骨鱼甲状腺干扰作用机制的研究进展
中国环境科学研究院外源污染过程与控制研究室
36616 例呼吸道感染患者腺病毒核酸检测结果分析
某部腺病毒感染疫情调查分析
外源钙对干旱胁迫下火棘种子萌发的影响
猪支原体肺炎活疫苗与猪伪狂犬活疫苗混合喷鼻试验