金线兰生根培养正交试验

黄勇 张铁 陈秋宏

摘 要 用金线兰试管苗作为试验材料，以基本培养基、IBA、NAA、活性炭4因素3水平进行正交试验。结果表明，在“1/2MS+IBA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+ AC 1.0 g·L-1”培养基中，生根率达90.87%，生根效果佳。

关键词 金线兰；生根；组织培养；正交试验

中图分类号：Q813.1 文献标志码：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2018.1.030

金线兰（Anoectochilus roxburghii）别名花叶开唇兰、金线莲等，是兰科开唇兰属一种多年生草本植物，因其叶脉呈金红色而得名[1]。金线兰是我国传统的珍贵药材，享有“金草”“神药”“乌人参”“药王”等美誉。其种子自然条件下极难萌发，由于长期采挖，野生种质资源稀缺。通过组织培养技术可对其进行抢救性保护[2～16]。组培苗是否具有良好的根系是成败的关键，但目前对金线兰组培苗生根培养的研究较少，且大多都是基于单因素进行分析与描述，难以确定最佳分析条件的精度。本试验在已有的研究基础上，以金线兰组培苗为外植体，着重研究基本培养基、生长素（IBA、NAA）、活性炭（AC）对生根的影响，应用L9（34）设计正交试验对金线兰生根培养基进行优化选择，不仅可以精简试验次数、克服培养基配方设计的盲目性，还可以大大提高工作效率和试验的可靠性，以期找出最佳生根配比方案，为改善金线兰快速繁殖条件提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

以文山学院组培实验室培养的金线兰组培苗为材料，挑选生长健壮、整齐一致的组培苗作为试验材料。

1.2 研究方法

1.2.1 正交试验设计

对基本培养基、IBA、NAA、活性炭4个因素分别选取3水平进行正交设计L9（34），研究其对金线兰组培苗生根的影响，试验因素及水平列于表1。

运用正交设计共形成表2的9个处理。

每个处理添加蔗糖30 g·L-1、琼脂7 g·L-1，pH值调至5.8。

1.2.2 接种与培养

将金线兰组培苗切成带有1个节、1.5～2.0 cm长的茎段，分别接种到上述9个处理的生根培养基中，每个处理接种13瓶，每瓶接种9个外植体，放置在培养温度为25 ℃，光照强度为1 000 lx，光照时间为10 h·d-1条件下进行生根培养。每7 d观察1次生长情况。

2 结果与分析

2.1 生根情况

培养21 d左右，金线兰茎段开始长根，随后根的数量进一步增多，并逐渐伸长。56 d左右，植株长势良好，苗粗壮，培养基底部可见大量根，平均根长1～2 cm，其表面被大量绒毛，较粗壮。在不同的生根培养基中，组培苗形成根的数量与根的长度不一。其中，最佳的生根培养基为处理A3B2C1D3（即1/2MS+IBA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+AC 1.0 g·L-1），根数最多，平均为2.8；根最长，平均达1.46 cm。

2.2 生根率极差分析

对不同处理的金线兰组培苗生根率进行极差分析，如表3所示。

由极差R的大小可以看出，4因素对金线兰组培苗生根率影响的大小顺序为：A>B>D>C。

由K值大小可以看出，各因素3水平对生根率影响的主次顺序分别为：A3>A2>A1， B3>B2>B1，C2>C3>C1，D3>D2>D1，即诱导金线兰组培苗生根的最佳组合是A3B3C2D3，这与生根率最高（90.87%）的组合A3B2C1D3不一致，可能是2种生长素（IBA和NAA）相互作用所致，故需对IBA和NAA进行交互效应检验。

2.3 IBA、NAA交互效应检验

对IBA和NAA作交互效应检验，如表4所示。

从表4可以看出，IBA*NAA的Sig<0.01，说明IBA和NAA之间对试管苗生根率存在极显著的交互作用。

2.4 不同因素对金线兰组培苗生根率方差分析

生根率在组培中是一个重要指标，且生根率和根数成正相关。为了更好地反应各因子对金线兰生根影响作用的差异，以便寻求最佳生根培养基组合，对试验结果作方差分析，如表5所示。

由表5可以看出，基本培养基、IBA、NAA、AC的Sig值均小于0.01，说明4个因素对组培苗生根率均具有极显著的影响。

3 结论与讨论

在已有研究基础之上，对影响金线兰生根培养的主要因素进行正交试验。MS培养基被广泛用于植物组织培养，诱导植物生根的时候多降低其大量元素浓度，本试验中大量元素减半最适合金线兰组培苗生根。诱导植物生根常用IBA和NAA两种生长素，一般說来，IBA可诱导出较多的根，而NAA可诱导出较粗的根。本试验将合理浓度的IBA、NAA搭配使用，取得了较高生根率。活性炭可促进试管苗生根，本试验亦如此。4因素对生根率影响的主次顺序为：基本培养基>IBA>活性炭>NAA，均具有极显著的作用，且IBA和NAA之间存在极显著的相互影响。通过正交试验，筛选出诱导金线兰组培苗生根的最佳培养基为“1/2MS+IBA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+ AC 1.0 g·L-1”，诱导率达90.87%，且根较粗壮。

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（责任编辑：丁志祥）