B细胞特异性激活蛋白PAX⁃5在间变性大细胞淋巴瘤中的异常表达及意义

李学锋 朱梅刚 丁向东 冯晓冬 张志魁 徐炜

广州金域医学检验中心病理科（广州 510005）

PAX⁃5基因是近年来发现的一种B细胞核反式转录因子，编码B细胞特异性激活蛋白（B cell⁃specific activator protein，BSAP），对正常B细胞的生长、发育、分化过程发挥重要调控作用［1-2］。PAX⁃5在原始B细胞到成熟B细胞中均表达，不表达于浆细胞和T细胞，被认为是特异的B细胞标记［3］。PAX⁃5阳性表达定位于细胞核，易于识别，已广泛应用于B细胞淋巴瘤的病理诊断［4］。此外，前期研究发现，约90%的经典型霍奇金淋巴瘤H/RS细胞特征性地表现为PAX⁃5弱阳性表达，而在间变性大细胞淋巴瘤中不表达，认为PAX⁃5对某些经典霍奇金淋巴瘤及形态学有重叠的ALK阴性间变性大细胞淋巴瘤的鉴别诊断有重要价值［5-6］。本实验对2012-2015年本中心诊断的淋巴瘤病例进行回顾性分析，并结合文献调研，研究PAX⁃5在T细胞淋巴瘤中的异常表达情况，对PAX⁃5在淋巴瘤病理诊断和鉴别诊断中的意义、存在的局限性以及鉴别诊断需注意的问题进行探讨。

1 材料与方法

1.1 材料 回顾2012-2015年广州金域医学检验中心确诊的T细胞淋巴瘤病例269例，包括前驱T淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病8例，外周T细胞淋巴瘤非特殊类型85例，血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤73例，NK/T细胞淋巴瘤66例，间变性大细胞淋巴瘤37例，所有病例均依据2008年版WHO造血和淋巴组织肿瘤病理学和遗传学进行诊断和分类［7］。

1.2 方法 异常表达PAX⁃5的间变性大细胞淋巴瘤病例CD3/PAX⁃5免疫组化双染一抗为CD3、PAX⁃5混合抗体，切片4℃孵育过夜，其余步骤与常规免疫组化相同。其中1例异常表达PAX⁃5的病例免疫球蛋白重链（IgH）和T细胞受体（TCR）基因重排检测均按美国病理家学会（CAP）的标准操作程序进行［8］。

2 结果

2.1 组织学改变 经回顾性分析，共发现2例间变性大细胞淋巴瘤，ALK⁃异常表达PAX⁃5。镜下，淋巴结正常结构破坏，在淋巴细胞、组织细胞、嗜酸性粒细胞背景上，可见片状或散在分布的体积中～大的异型淋巴细胞，细胞核不规则，核分裂象易见，部分肿瘤细胞核呈肾形、胚胎样，为典型的“标志性细胞”（图1）。其中1例淋巴结内部分区域瘤细胞散在分布，核仁明显，似RS细胞。

2.2 免疫表型 肿瘤性大细胞CD3、CD4（+）（图2、3），CD2、CD20、CD79a、CD15、ALK（-），CD30为典型的膜、点阳性模式（图4）；几乎所有的肿瘤性大细胞PAX⁃5均为细胞核弱阳性，PAX⁃5/CD3免疫组化双染显示同一个肿瘤细胞CD3（细胞膜）和PAX⁃5（细胞核）均阳性，证实PAX⁃5阳性的细胞为肿瘤性T细胞（图5）。

2.3 分子生物学检测结果 1例间变性大细胞淋巴瘤TCRγ基因重排阳性，IGH基因重排阴性。另外1例为会诊病例，未作基因重排检测。

图1 中～大异型淋巴细胞增生，可见标志性细胞 图2 CD3阳性（SABC法） 图3 CD4阳性（SABC法） 图4 CD30阳性（SABC法） 图5 PAX⁃5弱阳性，右下插图CD3/PAX5双染示同一个肿瘤细胞CD3（细胞膜）PAX⁃5（细胞核）阳性（SABC法）Fig.1 Proliferation of medium to large⁃sized atypical lymphocytes，Hallmark cells can be seen Fig.2 Neoplastic cells showed posi⁃tive staining for CD3（SABC） Fig.3 Neoplastic cells showed positive staining for CD4（SABC） Fig.4 Neoplastic cells showed positive staining for CD30（SABC） Fig.5 Neoplastic cells showed weakly positive staining for PAX⁃5.Immunohistochemical double⁃staining showed positive staining for CD3（membran）and PAX-5（nuclei）in the same neoplastic cells（lower right illustration）

3 讨论

淋巴瘤的正确诊断和分类是淋巴瘤治疗的基础和前提。肿瘤性淋巴细胞的细胞谱系（cell lin⁃eage）和来源是淋巴瘤分类的主要依据。目前，以HE形态为基础，通过免疫组化技术检测淋巴细胞谱系相关免疫标记，以及PCR技术检测IGH或TCR基因重排，已成为淋巴瘤诊断和分类的主要手段。

BSAP/PAX⁃5是1990年由BARBERIS等［3］发现的一种新的B细胞核转录因子，属于PAX基因家族成员，通过识别启动子、启动子近侧元件及增强子等顺式作用元件的特异性靶序列，调控与B细胞发育、分化等相关基因的表达，在B细胞的发育、增殖及终末分化等阶段都具有重要的调控作用。PAX⁃5基因在B细胞发育早期阶段即表达升高，并持续表达于B细胞分化成熟的整个阶段，不表达于浆细胞。

前期研究显示，PAX⁃5在绝大部分的B细胞淋巴瘤中均表达，其敏感性和特异性均优于经典的B细胞标记CD20、CD79a，且阳性定位于细胞核，易于识别，是非常有应用价值的可靠的B细胞标记［4］。而且，PAX⁃5更有意义的应用价值，在于随后发现大部分的经典霍奇金淋巴瘤中，H/RS细胞核PAX⁃5弱阳性表达，这一特征有助于其与形态有重叠的间变性大细胞淋巴瘤鉴别，一些文献［5-6］将这一特征作为经典霍奇金淋巴瘤与间变性大细胞淋巴瘤鉴别的重要依据。

然而，作为细胞核转录因子，其细胞谱系的特异性是相对的。现发现其他一些先前认为是B细胞特异性的转录因子如BOB⁃1、OCT⁃2，均可在T细胞淋巴瘤中表达，不具有细胞谱系的特异性［7］。本研究和前期的文献报导证实，虽然PAX⁃5是较为特异的B细胞标记，但亦可表达于T细胞，这种异常表达最多见于间变性大细胞淋巴瘤［6，8-10］。这一发现提示，对于形态学特点介于经典霍奇金淋巴瘤与间变性大细胞淋巴瘤之间的病例，如在相关免疫标记不全的情况下，将PAX⁃5的表达情况作为二者的鉴别依据，可能导致误诊。间变性大细胞淋巴瘤肿瘤性T细胞可出现一个或几个T细胞抗原丢失，甚至呈“裸细胞”表型，但大多数病例均表达一个或多个T细胞抗原，其中，CD2、CD4、CD3较为常见，基因重排检测通常能检测到TCR重排；间变性大细胞淋巴瘤通常CD45阳性，不表达CD15，即使表达，也仅少数细胞阳性；相反，经典霍奇金淋巴瘤通常不表达CD45，部分病例CD15阳性，TCR基因重排阴性，因肿瘤细胞数量较少，一般检测不到IgH基因重排。因此，在淋巴瘤诊断和分类时，必须应用并综合评价系列免疫标记的表达情况，必要时行IgH和TCR基因重排检测，确定肿瘤性淋巴细胞的来源。

PAX⁃5在T细胞淋巴瘤中异常表达的机制，还需要进一步深入研究。部分B细胞淋巴瘤中，存在PAX⁃5/IgH基因易位，导致PAX⁃5高表达［11-12］；ANDREW等［9］用PAX⁃5分离探针对4例PAX⁃5阳性的间变性大细胞淋巴瘤进行检测，均未发现PAX⁃5基因异位，但发现所有病例均存在额外的PAX⁃5等位基因拷贝，PAX⁃5等位基因拷贝数的增多，可能是PAX⁃5异常表达的分子遗传学基础。研究显示，PAX⁃5不仅作为B细胞核转录因子，调控与B细胞发育、分化等相关基因的表达，PAX⁃5还具有癌基因的生物学特性，与多种肿瘤的发生、进展、侵袭相关。体外实验性高表达PAX⁃5的胸腺细胞，可转化为T细胞淋巴瘤［13］；膀胱癌、神经内分泌肿瘤、星形细胞瘤中，均可出现PAX⁃5的高表达，并且与肿瘤的侵袭、进展和预后不良相关［14-16］。PAX⁃5在T细胞淋巴瘤中的异常表达，更有可能是作为癌基因在发挥其生物学作用，PAX⁃5异常表达的T细胞淋巴瘤可能更具有侵袭性［6］。这一方面，需要积累更多的病例和随访资料，并进行全面的临床病理研究和深入的分子遗传学分析。

总之，尽管PAX⁃5是比较特异的B细胞标记，但也可以表达于肿瘤性T细胞。PAX⁃5表达情况对形态有重叠的经典霍奇金淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤的鉴别诊断有价值，但如缺乏其他免疫表型的支持，则可能导致误诊；在淋巴瘤的诊断和分类，特别是某些经典霍奇金淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤的鉴别诊断过程中，必须结合临床特征、病理形态学特点，合理选用并综合评价系列免疫标记表达情况，鉴别诊断困难的病例，应进行IgH和TCR基因重排检测，方能做出正确诊断。

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