HPLC法测定甲磺酸雷沙吉兰片的有关物质

周敏 丁云晖 陈红霞

摘 要 目的： 建立HPLC 法测定甲磺酸雷沙吉兰片有关物质的方法。方法：采用Eclipse XDB-C18柱、乙腈-高氯酸溶液为流动相、检测波长为210 nm等条件下进行HPLC测定。结果：在该色谱条件下，主药和有关物质能较好地分离，雷沙吉兰浓度和峰面积在0.008 2～3.2 mg/ml内线性关系良好（r = 0.999 5，n=8），而杂质A和B的浓度和峰面积分别在0.001 6～3.2 mg/ml和0.002 1～3.2 mg/ml内呈良好的线性关系 （r =0.999 6，n=8）。结论：本方法简便、准确、可行、精密度高，可用于甲磺酸雷沙吉兰片有关物质的质量控制。

关键词 甲磺酸雷沙吉兰 HPLC 有关物质

中图分类号：R917 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2018）09-0077-04

Determination of the related substances in rasagiline mesylate tablets by HPLC

ZHOU Min*， DING Yunhui， CHEN Hongxia

（Shanghai Zhongxi Pharmaceutical （Group） Co.， Ltd.， Shanghai 201806， China）

ABSTRACT Objective： To establish a method for the determination of the related substances in rasagiline mesylate tablets by HPLC. Methods： HPLC was performed on Eclipse XDB-C18 column with acetonitrile-perchloric acid solution as a mobile phase at the detected UV wavelength of 210 nm. Results： The resolution between rasagiline mesylate and the other peaks met the requirements. The standard curves of rasagiline mesylate and the related substance A and B showed a good linearity over the range of 0.008 2～3.2 mg/ml， 0.001 6～3.2 mg/ml and 0.002 1～3.2 mg/ml， respectively. Conclusion： This method is simple， accurate and feasible with higher precise， and can be used as quality control of the related substances in rasagiline mesylate tablets.

KEy WORDS rasagiline mesylate； HPLC； related substances

雷沙吉兰是一种有效的、不可逆的、选择性单胺氧化酶B（MAO-B）抑制剂，能使纹状体细胞外多巴胺含量升高[1-3]。雷沙吉兰在多巴胺能神經运动障碍中的疗效，可能是间接通过升高多巴胺含量及因此而提高多巴胺能活性所实现[4]。与其他抗帕金森药物不同的是，甲磺酸雷沙吉兰还具有保护神经元和长期增效作用[5-6]。本品适用于治疗特发性帕金森氏病（不合用左旋多巴胺）或作为辅助治疗（与左旋多巴胺合用）治疗伴有剂末波动的帕金森氏病[1]。

而本研究建立一个检测时间短、且使用的溶剂相对环保的有关物质检测方法。经验证，该方法精密度高，专属性强，适合其有关物质的测定。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

1100及1200型高效液相色谱仪、紫外检测器、1200型DAD检测器和色谱工作站（美国Agilent公司）；AL104电子天平（梅特勒-托利多公司）；乙腈（色谱纯，Merck公司）；纯化水、氨水（分析纯）、高氯酸（优级纯）均购自国药集团化学试剂有限公司。甲磺酸雷沙吉兰工作用对照品（批号：GB17-001，含量99.8%）、2，3-二氢-1H-茚-1-酮 （简称：杂质A，纯度 99.9%，水分未检出）、2，3-二氢-1H-茚-1-胺盐酸盐（简称：杂质B，纯度99.96%，水分1.15%）、甲磺酸雷沙吉兰片（批号：T111001、T111002、T111003、20170809，规格：每片1 mg）均由上海中西三维药业有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 mm）；流动相：缓冲液（高氯酸溶液4.2 ml，加入水1 000 ml，用浓氨水调节至 pH 2.5）-乙腈（75∶25））；流速：1.0 ml/min ；紫外检测波长：210 nm；进样量：50 ml；柱温：25 ℃。

1.2.2 溶液配制

1）供试品溶液 称取本品细粉适量，加水适量，超声处理使甲磺酸雷沙吉兰溶解并制成每1 ml 中约含雷沙吉兰0.13 mg 的溶液，离心，取上清液用0.45 μm 滤膜滤过，作为供试品溶液。

2）对照溶液 精密吸取供试品溶液1 ml 置100 ml量瓶中，用水释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

3）系统适用性溶液 分别称取甲磺酸雷沙吉兰对照品与杂质A、 B对照品适量，加流动相适量溶解并用水稀释制成每1 ml 中分别约含2 μg 的混合溶液，摇匀，作为系统适用性溶液。

1.2.3 专属性实验

1）样品 取本品细粉适量（约相当于甲磺酸雷沙吉兰5 mg），置25 ml 量瓶中，加2 mol/L 盐酸溶液1 ml，80 ℃条件下水浴加热3 h，冷却后，加2 mol/L 氢氧化钠溶液1 ml 中和，作为酸破坏样品；加2 mol/L 氢氧化钠溶液1 ml，室温放置3.5 h，加2 mol/L 盐酸溶液1 ml 中和，作为碱破坏样品；加水适量溶解后，80℃条件下水浴加热5 h，放冷，作为高温破坏样品；加3%双氧水1 ml，室温放置5 h，作为氧化破坏样品；加水适量溶解后，置紫外光（4 500 lx）下直接照射5 h，作为光照破坏样品；上述样品均用水稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液用0.45 mm 滤膜滤过，取续滤液50 ml进样，记录色谱图。

2）空白辅料 取空白辅料适量，加水制成每 1 ml中约含空白辅料 8 mg 的溶液，采用上述样品专属性试验方法，对空白辅料用强光照射、高温、酸水解、碱水解和氧化的方法进行加速破坏，处理后的样品取续滤液进行HPLC分析，以研究辅料是否干扰样品有关物质检查。

2 结果

2.1 方法学考察

2.1.1 系统适用性试验

取系统适用性溶液进样测定，在上述色谱条件下，理论板数按雷沙吉兰峰计10 898，甲磺酸雷沙吉兰峰与杂質A、B峰间的分离度分别为22.88和10.42（图1）。

2.1.2 辅料干扰

空白辅料在相对保留时间0.5之前出峰，不干扰主药的测定。

2.1.3 检测限定量限

精密称取甲磺酸雷沙吉兰、杂质A、B对照品，分别不断地稀释后进样测定，按信噪比S/N=3 计算检测限，按信噪比S/N=10 计算定量限（表1）。

2.1.4 线性关系

分别精密称取甲磺酸雷沙吉兰对照品与杂质 A 和B 适量，分别加水适量使溶解，并用水稀释成数个浓度的供试品溶液，精密吸取 50 ml 注入液相色谱仪中测定，结果见表2。

2.1.5 校正因子

以表2中的线性方程，计算杂质A、B相对于甲磺酸雷沙吉兰的校正因子，结果显示：杂质A、B校正因子范围均在0.2～5.0之内、0.9～1.1之外[8]（表2），可以采用加校正因子主成分自身对照法计算不在范围内的杂质A、B的含量。

2.1.6 重复性试验

取同一批样品的供试品溶液、对照溶液各6份进行HPLC测定，经计算杂质总量平均为0.015%，RSD为3.8%，具有良好的重复性。

2.1.7 稳定性试验

取同一批号供试品溶液，在0、2、4、6、8、10 h进样测定，考察供试品中杂质峰面积的稳定性，结果表明供试品溶液在10 h 内杂质个数没有增加，杂质总量也基本稳定（表3）。

2.1.8 回收率试验

精密称取杂质A、杂质B及甲磺酸雷沙吉兰对照品适量，按处方量加入辅料，加适量流动相溶解，并用水稀释至以有关物质对照溶液浓度 50%为基准浓度的50%、100%、150%溶液。进样进行液相色谱测定，并按外标法以峰面积计算杂质A、杂质B、甲磺酸雷沙吉兰的测得量和回收率（表4）。结果表明，杂质A、杂质B、甲磺酸雷沙吉兰的回收率良好。

2.1.9 专属性试验

对破坏后的样品进行液相色谱分析，结果表明，甲磺酸雷沙吉兰片在碱、酸、氧化破坏中有明显降解，在光照和高温条件下表现出较稳定（图2）。各破坏条件下物料守恒，产生的杂质峰能与主峰有效分离。经破坏后的空白辅料溶液，均不干扰样品中杂质的检查。说明该色谱条件专属性较强，可有效检出各破坏的杂质（表5）。

2.1.10 耐用性试验

取同一批供试品溶液各50 ml 分别于0.8 、1.0 、1.2 ml/min 流速下进样，测定的有关物质分别为0.48%、0.47%、0.44% ；调节流动相比例为80∶20与70∶30条件下进样，所测定的有关物质含量分别为 0.49%、0.46% ；将色谱柱更换为Platisil ODS 柱（4.6 mm× 250 mm，5 mm），测定的有关物质含量为0.50%，表明该方法的系统耐用性良好。

2.2 有关物质检查

按自身对照法检测并计算三批样品杂质含量，结果显示，四批样品杂质A和B均小于0.50%、总杂质均小于1.0%（表6）。

3 讨论

本研究与文献[7]比较，检测时间较短，且使用的溶剂相对环保。对杂质A、B和甲磺酸雷沙吉兰对照品溶液进行DAD扫描，结果表明杂质A、B和甲磺酸雷沙吉兰均在210 nm处有最大紫外吸收，故选择210 nm为紫外检测波长。

单纯的酸破坏条件下主峰几乎没有降解，故在酸破坏时，增加了80 ℃条件下水浴加热3 h。在本法的高温、酸、碱、氧化、光破坏实验中，均有杂质A、B生成，产生的杂质峰能与主峰有效分离，样品主峰和各破坏性试验样品主峰的纯度因子均大于990，表明本法适用于有关物质的检查。

对有关物质检查方法进行方法学验证表明，该方法能较好地分离杂质峰与主峰并能够定量杂质。本验证内容符合药品质量标准分析方法验证指导原则附录[9]374，且验证数据准确可靠。

参考文献

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[9] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（2015 年版）四部[M]. 北京： 中国医药科技出版社， 2015 ： 374-378.