五苓散对脑梗死小鼠脑水肿及线粒体生物合成的影响

， ，2， ， ，， ，

脑梗死作为一种常见的脑血管疾病，具有较高的致残率和致死率，早期干预可使10%～50%卒中病人的认知功能得到一定程度改善[1-2]。多项研究证实，应用五苓散可有效改善病人脑水肿和神经功能损伤症状，但具体机制尚不明确。线粒体是机体能量代谢的重要场所，线粒体功能障碍与细胞毒性脑水肿及神经功能损伤程度密切相关，提示线粒体可能是五苓散发挥脑保护作用的重要靶点之一[3-5]。本研究拟通过构建小鼠脑缺血再灌注(MCAO)模型，探讨五苓散对脑水肿的影响，并进一步检测线粒体生物合成相关基因表达及线粒体DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)拷贝数的变化，为五苓散治疗脑梗死的机制研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物及试剂、仪器 雄性C57BL/6小鼠30只，体重25 g～30 g，购于军事医学科学院动物实验中心。总RNA/DNA共提取试剂盒(天根公司)，cDNA第一链合成试剂盒(天根公司)，real-time PCR剂盒(康为世纪公司)，real-time PCR仪(美国ABI公司，Step One Plus)，小动物麻醉机(瑞沃德公司)。

1.2 方法

1.2.1 五苓散配制 茯苓9 g，猪苓9 g，白术9 g，泽泻15 g，桂枝6 g，煎煮两次，合并药液后稀释成1 g/mL，4 ℃保存。

1.2.2 分组及相应手术操作 将小鼠随机分为对照组(S组)、大脑中动脉栓塞组(MCAO组)和五苓散组(W组)，各10只。MCAO组和W组采用线栓法构建右侧大脑中动脉栓塞模型：首先，以400 mL/min流量，2%浓度异氟烷麻醉小鼠后，取颈正中切口，分离颈内、外动脉；其次，结扎颈外动脉根部和颈总动脉近心端，另分别在颈内动脉和颈总动脉距远心端3 mm～5 mm处套线不结扎，为下一步线栓插入做准备；最后，颈总动脉远心端处夹一动脉……