家兔延髓迷走神经连合核的形态及细胞构筑研究

2018-06-06 09:30:08 科教导刊·电子版 2018年6期

潘玲玲

摘 要 本实验用石蜡切片和尼氏体染色的方法,对家兔延髓中迷走神经连合核的形态结构及核内细胞的数量、大小做了精确测量分析,测得迷走神经联合核全长2.1mm,位于中央管上方,由中央管两侧的迷走神经背核过渡而来。俯视观察呈“Y” 字型,侧视观察前端高度小,后端高度大,而后经过对部分家兔迷走神经连合核细胞面积的测定,最后得出家兔迷走神经连合核细胞大多为小型细胞,极少数为大型及中型细胞,这些结果为神经生物学奠定了一些形态学和解剖学的基础。

关键词 家兔 延髓 神经核 迷走神经连合核

中图分类号:S826.1 文献标识码:A

延髓位于脑干的最后端,是上下行神经传导的必由之路,具有许多复杂的结构和极其重要的生理功能。迷走神经连合核是延髓内的重要核团。位置在延髓尾段,中央管背外方,背正中隔近旁, 是副交感一般内脏运动核,发出迷走神经节前纤维,控制大部分胸腹腔脏器的活动,在器官内和旁节交换神经元。节后纤维管理胸腹腔内脏平滑肌、心肌、胃肌、腺体的运动和分泌。随着神经解剖学和神经生理学研究方法的不断发展,人们对其的认识也不断深入。然而,迄今关于家兔脑迷走神经连合核的实验研究国内很少有报道,仅见于国外六十年代以前的一些资料,其中Monnier等和H.Sawyer等人作的兔脑定位图谱虽较为系统,但仍有脑干包括不全和室位粗略之不足。这种状况远不能适应现代医学科研的要求。本课题拟对“家兔”的迷走神经连合核做细致的测量研究,從而为医学科研领域提供可靠详尽的神经解剖学依据。

1材料与方法

1.1兔脑石蜡切片的制作

1.1.1灌流固定、取材和水洗

家兔颈总动脉放血后,由该动脉向头端灌流10%福尔马林(4%甲醛)溶液700ml,进行固定。5日后取下兔脑用骨钳剥去头骨,取出脑组织,流水冲洗48小时以尽量洗去甲醛固定液。

1.1.2脱水与透明

水洗后的兔脑标本入50%乙醇24小时→70%乙醇24小时→95%乙醇24小时→正丁醇Ⅰ24小时→正丁醇Ⅱ24小时。

1.1.3透蜡和石蜡包埋

透明后的材料入1/2正丁醇+1/2石蜡24小时→石蜡Ⅰ24小时→石蜡Ⅱ24小时→石蜡包埋。

1.1.4连续切片

脑组织脱水、透明、浸蜡、包埋后做成一套20 m厚的脑切片,隔4张取1张,温水展片后各贴于0.5%铬矾明胶处理过的载玻片上,37oC24小时以上烘干。

1.2染色液的制备

1.2.1 Unna氏多色性美蓝染液配方

美蓝(Methylene blue)1g,碳酸钾1g,蒸馏水100ml,无水乙醇20ml。

1.2.2染液的制备

将配方内各成分混合后缓慢加热、搅拌使之溶解,然后室温下放置2-3日,染色时用蒸馏水稀释5-10倍。

1.3尼氏体染色

染色程序兔脑石蜡切片入二甲苯Ⅰ 10分钟→二甲苯Ⅱ 10分钟→1/2二甲苯+1/2无水乙醇2分钟→无水乙醇Ⅰ2分钟→无水乙醇Ⅱ2分钟→95%乙醇2分钟→70%乙醇2分钟→蒸馏水2分钟→Unna氏多色性美兰染液6分钟→乙二醇2分钟→自来水2分钟→50%乙醇2分钟→70%乙醇2分钟→95%乙醇2分钟→无水乙醇Ⅰ2分钟→无水乙醇Ⅱ2分钟→二甲苯Ⅰ2分钟→二甲苯Ⅱ2分钟→中性树胶封片。

1.4观察与统计计算

切片经过染色封片后,于室温下晾干。使用光学显微镜(日本Olympus公司)观察,并用microview MVC3000 数码显微照相机在光学显微镜(日本Olympus公司)和解剖镜(日本Nikon公司)下进行拍照。数码相片经过Adobe Photoshop处理,并用数据分析软件Scion Image(Version beta 4.0.2,美国Scion公司)进行图像中细胞的数据测量分析,Microsoft Excel XP进行生物统计处理。确定核团:根据前人对禽类和哺乳动物脑干延髓中神经核团的认识,结合光镜下对家兔脑干延髓中核团形态、位置以及组成核团细胞胞体形态,大小等特征的观察辨认核团。核团命名依据国际哺乳动物解剖学名词。

计算延髓内核团的吻尾径长度:根据该核团在冠状切面上出现的切片数乘以切片的厚度即为核团长度。

通过观察描述核团的形态、大小和位置。对细胞的观察主要通过4倍物镜下的肉眼观看,此时效果最佳。

观察和研究核团的细胞构筑:观察描述细胞的形态,测量细胞胞体直径,在高倍显微镜下,对可辨认出核仁的细胞胞体,过胞体中心测量该细胞的最长径和与该最长径垂直的径。用两者之和除以2的数据作为胞体的直径。

2结果

迷走神经联合核的染色结果、长度、位置、形态和大小

尼氏体和核仁呈天蓝色,背景色很浅或无色。细胞核的核质染色亦浅。迷走神经连合核全长2.1mm,在解剖镜下观察,位于中央管上方,由中央管两侧的迷走神经背核过渡而来。后端位于闩的前部,薄束核下方,前端位于延髓顶部,两侧薄束核之间,第四脑室后端消失。俯视观察呈“Y” 字型,侧视观察前端高度小,后端高度大,部分断面面积如表一所示。

迷走神经连合核尼氏体的形状小而圆,密度大,核为圆形居中,位置在延髓尾段,中央管背外方,背正中隔近旁。分尼氏体长径、短径及面积如表一所示。饶志仁等(1985)对鼠、杨振铎等 (1985)对狗的研究中,认为胞体直径在20 m以下为小型细胞,20-35 m为中型细胞,35 m以上为大细胞。据此可以看出,家兔迷走神经连合核细胞大多为小型细胞,极少数为大型及中型细胞。