油葵转基因方法的比较

焦 展， 安胜军， 邵铁梅， 李 雪， 刘 培

(1.河北化工医药职业技术学院/河北省高校生物反应器与蛋白类药物开发应用技术研发中心，河北石家庄 050026；2.河北中医学院，河北石家庄 050091)

油用向日葵(HelianthusannuusL.)别称油葵，是重要的油料作物之一。向日葵基因转化研究中较成功的方法多是以离体培养为基础的农杆菌介导法，外植体包括茎尖、成熟胚子叶、下胚轴、未成熟胚、原生质体等[1-7]；而关于油葵的转化研究相对很少[8]。另外，受基因型限制，再生率低、抗性愈伤分化率低、生根难导致获得完整转化植株困难，基因枪转化稳定整合率较低，且极易发生早花——这些离体培养中的问题严重限制了向日葵尤其是油葵的遗传转化研究进程。因此，本试验借助GUS组织化学染色，分别对油葵的去1张子叶转化法和温室子叶节转化法、花粉管通道柱头滴加转化方法和子房注射转化方法进行比较研究，验证了简便易行且效率较高的油葵转基因方法。同时，这些转化方法最低限度涉及或者完全不涉及离体培养，避免发生离体早花现象，能够获得完整的转化植株。本研究为优化油葵转基因体系提供技术参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

以罗马尼亚油葵“精选”恢复系为试材，由河北省半干旱研究中心河北华丰种业惠赠。GUS基因转化试验所用双元表达载体为pBI121：：GUS，根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)菌株为LBA4404，均由本实验室保存；含胰岛素基因的植物表达载体pBINOI由本实验室构建并保存[9]。

1.2 方法

1.2.1 农杆菌悬菌液的制备 接种农杆菌单菌落于液体YEB(5 mL)中。……