甘露糖化羧甲基壳聚糖与依替膦酸复合物纳米粒靶向结合M 2型巨噬细胞的实验研究

黄燕，蒋鸥#，文庆莲，刘宇，林盛，何玉，吴敬波，孟凡智，马成

1西南医科大学附属医院肿瘤科，四川泸州646000

2西南医科大学附属内江市第二人民医院肿瘤中心，四川内江641100

肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophage，TAM）即肿瘤微环境内聚集着大量的巨噬细胞。TAM可以粗略地分为M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞。M1型巨噬细胞具有吞噬、清除异物及抗肿瘤的作用，而M2型巨噬细胞主要发挥免疫抑制的功能，对肿瘤的发生、发展和浸润具有促进作用[1]。外周单核细胞在肿瘤细胞分泌的催化因子的作用下，迁移至肿瘤微环境中，并分化成M2型巨噬细胞[2]，M2型巨噬细胞是肿瘤微环境中主要的炎性细胞成分。M2型巨噬细胞的特点为高表达甘露糖受体，而其他细胞一般不表达或呈低表达[3]。研究发现，采用抗甘露糖受体的单克隆抗体封闭M2型巨噬细胞表达的甘露糖受体后，能够加强肿瘤的抗原呈递作用，强化肿瘤免疫应答[4]；同时可以减少病灶的淋巴结转移[5]。由此推断，M2型巨噬细胞表面的甘露糖受体可作为肿瘤靶向治疗的靶点[6]。本研究通过缩合反应将甘露糖基接枝于壳聚糖上，利用壳聚糖与依替膦酸之间发生的离子交联反应，构建纳米粒。观察纳米粒与多种细胞，尤其是M2型巨噬细胞的结合能力，为后期的基础实验提供依据，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

2-吗啉乙磺酸（2-morpholinoethanesulfonic acid，MES）、羟甲基壳聚糖（carboxymethyl chitin，CMC）、1（-3-二甲氨基丙基）-3乙基碳二亚胺盐酸盐[1-Ethyl-3（-3-dimethylaminopropyl）carbodiimide，EDC]、佛 波 酯（phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA）、N-羟基丁二酰亚胺（N-Hydroxy succinimide，NHS）、脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate isomerⅠ，FⅠTC）均购自美国Sigma公司；Bruker超导脉冲傅立叶变换核磁共振波谱仪购自瑞士Bruker公司；……