慢病毒介导CDCA5敲低的三阴乳腺癌细胞的构建及鉴定

吕璐冶，黄燕，李万金，韩秋影,宋楠，张学敏，周涛

国家生物医学分析中心，北京 100850

乳腺癌是一类发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤[1]，其发病率位居女性肿瘤第一位，约占女性新发肿瘤的30%，致死人数占女性肿瘤死亡总人数的14%[2-4]。其中三阴乳腺癌（triple-negativebreast cancer）患者约占乳腺癌患者总体病例的20%，其特点是肿瘤细胞缺乏雌激素受体（estrogenreceptor，ER）、孕激素受体（progesteronereceptor，PR）和人表皮生长因子受体2（humanepidermalgrowthfactor receptor2，HER2）的表达[5-7]。与非三阴乳腺癌相比，三阴乳腺癌往往具有较快的肿瘤进程和较强的侵袭性，并且对化疗响应差。患者发病5年内具有较高的复发率及死亡率[8-10]。目前临床使用的主要治疗手段如手术、放化疗、免疫治疗、内分泌治疗等，对三阴乳腺癌治疗效果有限，因而寻找新的三阴乳腺癌治疗靶点具有重要意义[9,11]。

细胞分裂周期相关蛋白5（celldivisioncy⁃cleassociated5，CDCA5）是细胞周期有丝分裂检查点重要复合物——Cdh1激活的后期促进复合物（anaphase-promotingcomplex，APC）的底物，参与调节姐妹染色单体与黏连蛋白的结合[12-14]。CDCA5在脊椎动物中广泛表达，保守性强，且在其他种类生物如酵母、爪蛙卵中存在同源基因，同样参与调节黏连蛋白与染色体之间的相互作用[13]。有研究指出，敲除CDCA5显著影响G2期细胞维持黏连蛋白与DNA稳定结合[15]。近年研究发现CDCA5在多种亚型肺癌中高表达，超过70%的非小细胞肺癌呈CDCA5阳性，并且指示不良预后[16]。但是CDCA5作为癌基因，在乳腺癌及其他肿瘤中是否发挥作用有待研究。

RNA干扰（RNAinterference，RNAi）技术是一种能够特异性敲低或沉默体内目的基因表达的分子生物学技术[17-18]，具有高效、稳定、特异性强、可遗传等优点，是生物学研究的重要工具[19-21]。……