红树林沉积物中芘降解菌群及其代谢质粒转化菌的研究

蔡丽希, 陈小萍, 刘黎星

(莆田学院 基础医学部，莆田 351110)

多环芳烃(PAHS)是一类广泛存在于环境中的具有致畸、致癌、致诱变的典型有机污染物[1]，尤其是像4环芘一样的高分子量多环芳烃很难被氧化降解，对生态环境和人类健康造成极大的威胁[2-3]。目前微生物修复被认为是治理PAHS污染的最具潜力的修复方法[4]。但是研究工作已经从单一筛选能够降解PAHS的微生物转变为基因调控机制、代谢途径和高效工程菌的研究[5-6]。本实验采用富集培养的方法从海洋红树林表层沉积物中筛选出多环芳烃芘的降解菌群，提取其质粒并导入至大肠杆菌DH5α中，驯化筛选出降解芘的高效基因工程菌群[7]，并进一步探讨了该菌群和质粒的降解机制，进而为芘的微生物修复提供重要的科学依据[8]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

土样采样于海洋红树林区的表层沉积物。

芘购置于Sigma-Aldrich 公司；二氯甲烷、甲醇(色谱纯)购置于江苏汉邦科技有限公司。

海洋细菌培养基：磷酸高铁0.01 g；酵母浸膏1 g；蛋白胨5 g，加陈海水定容至1 L，pH 7.6～7.8。

无机培养基(MSM，mg/L)： MgSO4·H2O(200)； Na2HPO4(800)；(NH4)2SO4(1000)；CaCl2·2H2O(100)；(NH4)6M0O24·4H2O(1)；FeCl3·6H2O(5)；KH2PO4(200)；pH值为7.2，121℃，灭菌15 min。

芘母液：芘溶解于丙酮并定容为浓度5 mg/mL的母液，经0.22 μm尼龙膜过滤后封口避光保存。

PYR-MSM培养基：依据不同的芘终浓度(50～500 mg/L)，移取一定体积的芘母液到无菌的无机培养基中，过夜待丙酮挥发后使用。

1 .2 实验方法

1.2.1 环境样品的富集培养

分别称取10 g新鲜红树林表层沉积物样品和8 g无菌小玻璃珠，置于盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，25℃，150 r/min恒温震荡3 h[9]。静置30 min后，移取5 mL上清液至45 mL新配置的以芘为唯一C源与能源的PYR-MSM培养基中(芘终浓度为100 mg/L)。……