三种培养基对人脐带间充质干细胞培养生长和数量影响的比较

高健伟，郭红燕，李艳生

人脐带间充质干细胞在实验及临床有广泛的应用，取得了很多很好的成果，逐渐成为人们研究的热点；但干细胞的培养扩增还存在较多问题，很多因素都可能导致原代干细胞体外培养失败（如选择培养基、血清、脐带质量、无菌情况、技术操作等），即使成功培养间充质干细胞 （mesenchymal stem cells，MSCs），其生长状态不良、数量少、细胞收集不足等情况，影响实验结果。笔者对目前使用的三种不同培养基进行原代干细胞培养，对其观察细胞培养数量的结果具体分析如下。

1 材料与方法

1.1 培养基、试剂和仪器 低糖DMEM、高糖DMEM、DMEM/F12（均使用 HyClone），青霉素和链霉素 100×（Solabio），15%FBS（Gibco），培养皿（美国康宁），倒置显微镜 （100×），荧光倒置显微镜（100×）。

1.2 不同培养基的培养皿孔数计数 全部采用同一厂家6孔培养板，同一培养板只能用一种培养基，共3板，1孔为一份标本，共18份标本。

1.3 培养时间和观察内容 不同培养时间点，分别是 7、10、15、20、25 d， 在不同时间点观察不同培养基对细胞游出面积、细胞计数的影响。

1.4 脐带采集和培养 人脐带间充质干细胞原代培养采用组织块贴壁法进行，同一婴儿的脐带进行三种不同培养基培养。足月、健康剖腹产产妇的新鲜、无菌、健康的新生儿脐带长约24 cm，用4℃无菌恒温盒储存运输，即刻消毒，用PBS（含1∶1000的青霉素和链霉素）反复冲洗表面血迹和血管内残留血液，清洗彻底干净，随后用组织剪剪取干净、清亮、饱满部分的脐带，每一段长约1 cm，挑选取用18段用PBS再次反复冲洗。冲洗干净后用血管钳和眼科剪细心分离先将脐带静脉和动脉去除，然后去除羊膜，剩余即为华通胶。……