DNA池快速筛查奶牛TLR2 基因多态性及等位基因频率估算

杨永江，吴恩芸，禹保军，刘容秀，马博妍，岳仁宽，刘丽霞，张 丽

（西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃 兰州730030）

TLR2基因是Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）蛋白基因家族的重要成员之一，在机体介导天然免疫和抗病抗感染方面起着重要的作用[1-2]。TLR在机体内分布广泛，其中TLR2基因主要分布于免疫细胞如单核细胞、树突状细胞和巨噬细胞，协同TLR4连接天然免疫和获得性免疫[3]。已有大量研究证实，过度的免疫反应所致的自身免疫疾病和慢性炎症均与TLR2在体内的过度表达有关[4]。TLR2基因识别谱广，可识别大部分已发现的病原相关分子模式（Pathogen associated molecular patterns，PAMP）结构，Beutler等[5]认为TLR2识别PAMP后介导的过激天然免疫应答与败血症的发生密切相关。因此，TLR2拮抗剂在疾病的防治和治疗中的负调控机制是近年来的研究热点[6]。NO在机体内起着信使分子的作用，Thoma-Uszynski等[7]的研究结果表明结核分枝杆菌的脂蛋白可通过刺激小鼠的TLR2，从而诱发NO依赖性的杀菌活性。此外在TLR2介导活化效应的大量研究中，单克隆抗体的试图制备进一步为研制抗感染及信号阻断新药品打下基础[8]。牛TLR2基因定位于17号染色体上[9]，含2个外显子，基因全长13.2 kb，其中mRNA序列全长3.5 kb，编码784个氨基酸。

研究表明在乳房炎患病的中国荷斯坦牛乳腺细胞内TLR2呈现过度表达状态[10]。国内关于TLR2基因在奶牛乳房炎上研究较少。马腾壑等[11]仅发现1个SNP（single nucleotide polymorphism，SNP）可能与奶牛的乳房炎抗性有关。DNA池技术是提取具有某一共同特征群体DNA为模板按比例混合成池，这种混合DNA样品再经PCR扩增测序后，结合琼脂糖凝胶电泳或聚丙酰胺凝胶电泳（PAGE）结合测序可直接检测出SNPs的一种方法。……