氨基酮戊酸光动力疗法对小鼠RAW264.7巨噬细胞株Toll样受体2信号转导通路的影响

陈向齐 林兵 刘志宏 昊霞 宋洪涛 陈胜平

350025福州，厦门大学附属东方医院 解放军福州总医院皮肤科（陈向齐、陈胜平），药学科（林兵、刘志宏、昊霞、宋洪涛）

光动力学疗法用于治疗痤疮疗效显著，副作用小，已成为目前的研究热点。氨基酮戊酸（ALA）经上皮细胞及毛囊皮脂腺吸收后，可以通过血红素合成途径代谢为原卟啉Ⅸ，当光线照射时，PpIX受激发产生单态氧和自由基，使得细胞凋亡，皮脂腺萎缩，痤疮丙酸杆菌被杀灭。Toll样受体（Toll⁃like receptor，TLR）在细胞表面以模式识别受体（pattern recognition receptors，PRR）方式识别细菌脂多糖、脂蛋白和鞭毛蛋白等分子。通过髓样分化因子88（MyD88）依赖和非依赖途径，导致炎症介质如细胞因子、一氧化氮或干扰素产生［1］。但痤疮丙酸杆菌细胞壁表面肽聚糖能否被细胞膜上TLR2受体识别，并通过MyD88依赖的和非依赖的途径产生细胞因子，国内尚未见报道。本研究探讨氨基酮戊酸光动力疗法（ALA⁃PDT）免疫调控作用机制，为阐述TLR2在痤疮天然免疫和获得性免疫中的作用提供理论依据。

资料与方法

一、试剂

含10%胎牛血清DMEM培养基（美国Gibco公司），小鼠巨噬细胞株RAW264.7（上海细胞生物研究所），痤疮丙酸杆菌（ATCC6919）（广东省微生物研究所），厌氧脑心浸液肉汤培养基（青岛海博生物技术有限公司），ALA（上海复旦张江生物医药股份有限公司），肿瘤坏死因子α（TNF⁃α）、白细胞介素6（IL⁃6）试剂盒（上海西塘生物技术有限公司）。抗TLR2抗体（ab⁃16894）、抗MyD88抗体（ab⁃2068）、抗p38抗体（ab⁃31828）、抗p⁃p38抗体（ab⁃207483）、抗JNK抗体（ab⁃176662）、抗p⁃JNK抗体（ab⁃207477）、抗ERK抗体（ab⁃54230）、抗p⁃ERK抗体（ab⁃214362）、抗IκBα抗体（ab⁃5076）、抗p⁃IκBα抗体（ab⁃209942）［艾博抗（上海）贸易有限公司］。

二、方法

1.细胞培养：在37℃、5%CO2培养箱环境下，将小鼠巨噬细胞株RAW264.7接种于培养皿中，用DMEM培养基培养。……