月桂醇硫酸钠对金黄色葡萄球菌的抗菌作用研究

王升　衷驰　何正飞　吴显杰　郭丽娟

【摘 要】通过配制等差梯度的月桂醇硫酸钠溶液分别作用于相同形态大小的金黄色葡萄球菌培养基并设立空白对照，观察其它培养基菌落形态数量与空白对照培养基菌落形态数量的差别，结果显示，随着月桂醇硫酸钠溶液浓度的递增，菌落抑菌圈直径越大。初步证明月桂醇硫酸钠具有一定的抗菌作用，且只能阻止细菌的生长繁殖，并不能直接杀灭细菌。高浓度的月桂醇硫酸钠溶液对金黄色葡萄球菌的排斥效果更强。

【关键词】月桂醇硫酸钠 金黄色葡萄球菌 抑菌圈

一、前 言

阴离子表面活性剂月桂醇硫酸钠（SDS）有亲水亲油结构并且能降低表面张力和表面能，还能对溶液进行乳化、润湿、成膜等。SDS现在已经广泛地应用于生物工程、临床医学诊断和治疗、纳米材料等高新技术领域。随着温度的升高，月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠的临界胶束浓度逐渐增大，电导率升高。随着对SDS结构与性能的认识和研究，近来发现月桂醇硫酸钠可以显著增强治疗良性前列腺增生的药物—度他雄胺的荧光强度，从而简便、快速、灵敏、准确检测人体血清及度他雄胺软胶囊中度他雄胺含量。SDS能够提高黄酮类药物槲皮素的溶出度，从而提高它的生物利用度。SDS能够淋洗修复土壤中以萘为代表的多环芳烃污染物。月桂醇硫酸钠可作为表面去污活性成分，与抗菌液混合制备一种新型的洗手液。近年来发现利用低浓度SDS涂抹小鼠皮肤可建立银屑病动物模型。

金黄色葡萄球菌（SA）是一种临床常见革兰氏阳性致病菌，能引起蜂窝织炎、伪膜性肠炎、气管炎、伤口化脓及败血症、脓毒血症等全身性感染。但由于抗生素的滥用，相继出现了耐青霉素、耐甲氧西林、耐万古霉素的SA。因此抗金黄色葡萄球菌感染仍然是一个具有挑战性的工程，尤其是金黄色葡萄球菌的耐药性问题，还需要进一步的研究。本实验设置等差梯度溶液组以及空白对照组探究不同浓度月桂醇硫酸钠溶液对金黄色葡萄球菌作用后结果的对比与分析，阐述月桂醇硫酸钠是否具有抗菌活性。

二、实验部分

1.仪器与试剂

金黄色葡萄球菌冻干粉标准菌株（ATCC25923）、菌株复溶液A（南京便诊生物科技有限公司）培皿型号：6cm*10（深圳市好质全实验室耗材有限公司）月桂醇硫酸钠凝胶 SLES 2EO （山东优索化工科技有限公司）高压蒸气锅、恒温水浴箱、100ml容量瓶、量筒、托盤天平、游标卡尺

2.溶液制备

配制等差梯度浓度的月桂醇硫酸钠溶液，物质的量浓度分别为0.125、0.250、0.375、0.500mol/L。托盘天平分别称量3.6g、7.2g、10.8g、14.4g月桂醇硫酸酯钠晶体，并分别溶于100ml水，制得物质的量浓度分别为0.125、0.250、0.375、0.500mol/L的月桂醇硫酸钠溶液。

3.培养基制备

制备Baird-Parker培养基。取30%卵黄盐水50ml与除菌过滤的1%亚锑酸钾10ml混合，保存于冰箱内。加入胰蛋白胨10g，牛肉膏5g、酵母膏1g、丙酮酸钠10g，甘氨酸12g，氯化锂5g，琼脂20g、蒸馏水950ml，加热煮沸至完全溶解。冷却至25℃，校正pH。分装每瓶95ml，121℃高压灭菌15min。每瓶加入预热至50℃的卵黄亚锑酸钾增菌剂5ml，摇匀后倾注平板。

制备7.5%氯化钠肉汤培养基。加入蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠75g，蒸馏水1000ml加热溶解，调节pH至7.4，分装每瓶225 ml，121℃高压灭菌15min。

4.细菌接种培养

挑选金黄色葡萄球菌菌种接种于7.5%氯化钠肉汤培养基内，置于37℃恒温浴箱培养6-8h。将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker培养基，于36℃±1℃培养18-24h。

5.细菌形态观察

在温度37℃，pH 7.4的干燥环境下，培养基金黄色葡萄球菌菌落厚、有光泽、圆形凸起，菌落平均直径0.5-1.0㎜。

6.药敏实验

制作药敏片、抗菌药纸片 取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖。

用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。

7.抑菌圈直径测量

将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度呈梯度递减，因此在纸片周围一定距离内的细菌生长受到抑制。过夜培养后形成一个抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。药物琼脂周围的一段区域不生长细菌，且呈圆形，以琼脂中点为圆心，圆心至圆形边缘（菌落区与无菌落区交界处）的距离为抑菌圈直径，抑菌圈内无细菌生长。

抑菌圈直径（㎜）与敏感度定量关系20以上极敏、15—20高敏、10—14中敏、10以下低敏、0不敏

三、结果与讨论

实验中培养基抑菌圈直径数据列于表1

从表1中得出，随着月桂醇硫酸钠溶液浓度等梯度增加，1-4号培养基菌落数量愈来愈少，且均少于5号培养基。证明月桂醇硫酸钠具有一定的抗菌作用，且高浓度的月桂醇硫酸钠的抑菌效果更加明显。此外，抑菌圈直径也随浓度增加呈现增大的趋势。

月桂醇硫酸钠不同于抗生素和磺胺药物，抗生素有两种抗菌机制，一是通过与细菌细胞壁成分结合形成复合物，从而阻断细胞壁的合成，导致细菌死亡.二是通过抑制细菌肽链、蛋白质生物合成，抑制其生长和繁殖。磺胺药物是通过抑制二氢叶酸转换为四氢叶酸，从而干扰一碳单位的传递，影响核酸的合成，导致细菌不能生长繁殖。而月桂醇硫酸钠可能只是对细菌造成排斥，影响其生长繁殖，并不能直接杀灭细菌。

四、结论

本实验通过设置等差梯度的溶液初步证明月桂醇硫酸钠具有一定的抗菌作用，且只能阻止金黄色葡萄球菌的生长繁殖，并不能直接杀灭细菌。高浓度的月桂醇硫酸钠溶液对金黄色葡萄球菌的排斥效果更强。但是月桂醇硫酸钠对金黄色葡萄球菌具体作用机制及细菌对药物是否具有耐药性均尚不清楚，需要开展进一步的研究。

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