液基细胞技术与常规粪便检测技术在宠物犬肠道寄生虫检测中的比较

廖诗英

(湖北文理学院，湖北襄阳 441053)

液基细胞技术由美国Cytyc公司在1987年研发成功，1991年获得美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration，FDA)批准，我国在2000年以后开始广泛应用于各医疗服务机构，用于取代传统的巴氏试验(Papanicolaou test)。液基细胞技术是利用细胞学原理，去除细胞样品中诸如黏液等影响因素，将样本细胞溶于固定液，染色后涂片镜检，可自动化操作，节约检测样本的时间，极大地提高了涂片质量及读片结果，减少许多人为因素的影响。液基细胞技术已被全球医疗机构证明是一项成熟的检测方法，广泛用于宫颈癌、口腔癌、肛门癌、甲状腺癌等癌症的筛查诊断。美国DK Diagnostics公司研发的PARATEST液基寄生虫检测试剂盒，采用液基细胞技术原理，在溶解粪便样品时保持了虫卵和寄生虫的细胞活性，通过过滤和沉降体系提高虫卵和寄生虫检出率。此技术操作快捷简便、结果可靠，目前已在全球20多个国家推广使用[1-3]。为了探讨PARATEST试剂盒在宠物肠道寄生虫检测中的作用，特设计本次试验。

1　材料与方法

1.1　材料

选择2017年4月～10月的179只宠物犬，收集新鲜粪便作为检查样本。

1.2　方法

1.2.1直接涂片法滴1滴生理盐水与洁净的载玻片上，用竹签挑取绿豆大小的粪便放入水中涂抹均匀，涂片厚度以透过玻片可看清书上的字迹为宜，加盖玻片后镜检。为提高检出率，每个检样连续做3次涂片[4-5]。

1.2.2饱和盐水浮聚法自粪便不同处挑取蚕豆大小的粪块加入适量饱和盐水调成混悬液，用60目铜筛滤去粗渣，过滤后的粪液倒入于浮聚瓶中，再慢慢加入饱和盐水至液面略高于瓶口，在瓶口上覆盖一载玻片，静置15 min后，将载玻片提起并迅速翻转，镜检[6]。

1.2.3清水沉淀法取20 g粪便加水制成混悬液，用60目铜筛过滤，滤液倒入三角瓶中，加水500 mL，静置30 mim，倒去上层液，重新加入清水500 mL，静置20 min，此后重复换水2次～3次，直至上层液清亮为止。最后倒去上层液，取粪便沉渣做涂片镜检[7-8]。

1.2.4PARATEST液基过滤沉降法采用美国DK Diagnostics公司生产的PARATEST试剂盒对粪便样本进行检查。PARATEST试剂盒中盛有液基保存液，具有保持粪便样本新鲜的功效，使寄生虫及虫卵免遭破坏。其锥形的瓶盖内置高精度滤膜，可去除干扰检测的残渣成分。检查时，取2 g粪便装入PARATEST液基保存液瓶中，盖上锥形瓶盖，摇匀样本瓶，将瓶倒置在托盘上，静置15 min钟后，轻挤压试剂瓶，弃去最初的1滴，滴1滴样品到载玻片上，盖上盖玻片镜检。

1.2.5统计处理本试验数据采用SPSS17.0软件进行统计分析，采用t检验，计数资料对比采用2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

试验结果表明，直接涂片法对各种肠道寄生虫的检出率最低，饱和盐水浮聚法对犬钩口线虫、犬弓首蛔虫和等孢球虫的检出率最高，但对华支睾吸虫、犬贾第虫和隐孢子虫的检出率为0。PARATEST液基过滤沉降法对犬钩口线虫、犬弓首蛔虫和等孢球虫的检出率稍低于饱和盐水浮聚法，二者差异不显著；对华支睾吸虫和犬贾第虫、隐孢子虫等原虫的检出率显著高于其他3种方法(表1)。

3　讨论

直接涂片法适用于检查各种肠道寄生虫，方法简便，但由于取材较少，检出率较低，容易造成漏诊，不适合作为低感染地区的检测方法，只能配合其他方法使用[9]。饱和盐水浮聚法主要用于检查钩虫卵、绦虫卵及球虫卵囊等比重较小的虫卵及卵囊，对比重较大的吸虫卵效果不理想。清水沉淀法常用于检查吸虫卵，但是操作复杂、费时、费力，且虫卵长时间浸泡在低渗溶液中，易发生形态变化，使虫卵不易辨认[10]。PARATEST液基过滤沉降法，利用液基细胞学原理，有效地保持了样本中虫卵和原虫的细胞活性，并通过过滤和沉淀体系分离粪便残渣与虫卵，只需静置沉淀15 min便可起到很好的集卵效果，大大提高了虫卵和寄生虫的检出率。在本次试验中，对多种常见宠物犬肠道寄生虫均有较高的检出率，尤其对犬贾第虫、隐孢子虫等原虫的检出率优势明显。

表1　4种检测方法对179只宠物犬粪便样本肠道寄生虫检出率比较

注：与PARATEST液基过滤沉降法比较，“a”P<0.05；“b”，P<0.01。

Note: Compared with PARATEST liquid-based filtration and sedimentation method,"a"P<0.05；"b"P<0.01.

此外，PARATEST液基细胞检测技术具有操作简便，无需特殊仪器，只需一台显微镜即可进行检测，特适宜基层诊疗机构使用。采集的粪便样品在PARATEST试剂盒中无需冷藏，可常温保存15 d，方便运输及合理安排检测时机，操作过程中，粪便始终隔离在试剂瓶中，无异味，更受检验人员欢迎。