肥胖及超重不孕妇女抗精子抗体的评价

江欢，李晓红，朱伟杰

(1.深圳市龙岗区妇幼保健院生殖内分泌科，深圳 518172；2.暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所，广州 510632)

肥胖是体内脂肪细胞(adipocyte)数目增多或体积增大，脂肪堆积过多，使体重超过标准体重20%以上的病理状态。随着现代生活水平的提高和生活方式的改变，以及体内激素代谢变化的影响，育龄妇女的肥胖率逐渐升高[1]。肥胖参与了女性不孕的病因学发生和发展[2]。脂肪细胞具有内分泌作用，通过分泌多种脂肪细胞因子(ACK)影响女性生殖激素的合成和代谢。肥胖妇女卵巢内雄激素合成增加，性激素结合球蛋白(SHBG)分泌减少，可导致卵巢的卵泡发育受阻或闭锁，发生排卵障碍和不孕[3]。

脂肪细胞与免疫反应关系密切，多种ACK可以影响机体的免疫功能，参与机体内炎性反应的过程[4]。肥胖通常伴随着机体的慢性炎症状态，这种炎症的发生发展与多种免疫细胞密切相关，如T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞和巨噬细胞等，因此，肥胖者普遍存在不同程度的免疫紊乱[5]。抗精子抗体(ASA)是机体免疫系统针对精子抗原产生的特异性抗体，是引起女性免疫不孕的原因之一[6]。肥胖妇女体内多种免疫因子高表达，机体处于亚炎症状态，是否更易被精子抗原激起免疫反应尚无统一观点。本研究检测了肥胖及超重不孕妇女体内的ASA水平，为探讨ASA是否介导肥胖妇女的生育力降低提供参考资料。

资料与方法

一、研究对象

收集2017年2～12月于深圳市龙岗区妇幼保健院生殖内分泌科的就诊的190例不孕妇女为研究对象，年龄26～35岁，不孕年限2～7年。根据世界卫生组织(WHO)诊断标准，按照不同的体重指数(BMI)分成3组：体重正常组(A组)：BMI≤24 kg/m2，90例；超重组(B组)：24 kg/m2

二、研究方法

收集3组妇女的血清标本，进行血清性激素水平检测，并采用间接免疫珠试验(iIBT)检测血清ASA水平。免疫珠为抗IgG和IgA型(Irvine Scientific，美国)。ASA检测程序按WHO精液分析手册方法进行。洗涤后精子悬液进行1∶5稀释，37℃孵育60 min，用含0.3%牛血清白蛋白的DMEM培养液(GIBICO，美国)洗涤孵育后精子2次，调节精子悬液为20×106/ml(指活动精子)。取5 μl精子悬液置于玻片上，加入5 μl免疫珠，混匀。采用相差显微镜400倍镜检查，观察200个活动精子，以黏附免疫珠的活动精子数>50%为阳性；以活动精子数20%～49%为弱阳性，<20%为阴性。每次实验均设阳性及阴性对照。

三、统计学分析

结 果

一、3组患者一般资料的比较

3组患者的平均年龄、不孕年限比较，C组有略高于其他两组的趋势，但差异无统计学意义(P>0.05)；3组患者的BMI比较，组间差异有统计学意义(P<0.05)(表1)。

表1 三组患者一般资料比较(-±s)

注：与A组比较，*P<0.05；与B组比较，#P<0.05

二、3组患者血清ASA水平比较

A组90例患者中检出1例ASA-IgG阳性者，阳性率为1.1%；B组和C组没有检出ASA-IgG阳性者。A、B和C组分别检出2例、1例和1例ASA-IgG弱阳性者，弱阳性率分别为2.2%、1.6%和2.6%。3组的弱阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05)(表2)。3组均没有检出ASA-IgA阳性者。

表2 三组患者血清ASA水平比较 [n(%)]

讨 论

人体内的脂肪细胞分泌逾百种ACK[7]，其中大部分ACK具有激素和免疫刺激作用，可以干扰女性正常生殖内分泌功能，改变机体的免疫功能[8]，导致肥胖妇女处于不同程度的亚炎症状态。精子对女性而言是一种同种异体抗原，ASA是女性免疫不孕的原因之一[9-12]，当女性生殖道的防御机制受到破坏或机体免疫系统失衡时，免疫系统可针对精子抗原发生特异性免疫应答，产生ASA。阐明肥胖妇女是否更易对精子抗原致敏，有助于进一步分析肥胖不孕妇女的不孕原因及开展针对性治疗。

根据WHO精液检查与处理手册的标准，只有当50%或更多的活动精子黏附有免疫珠时，ASA介导的免疫不育的诊断方可成立。本研究中超重及肥胖组妇女血清ASA-IgG阳性率为0，且这两组ASA-IgG弱阳性率也较低(分别为1.6%和2.6%)，提示ASA可能不是介导肥胖妇女不孕发生的主要因素，肥胖妇女不孕症的发生可能与肥胖引起的免疫功能紊乱关系不大。正常情况下女性对精子抗原的多重防御机制及生殖道粘膜上皮的完整性，能够避免进入生殖道的精子诱发免疫反应。当炎症、损伤等理化因素使生殖道局部黏膜的通透性增加，精子抗原暴露于免疫系统，而且免疫防御机制受到破坏或失平衡时，精子抗原则可以刺激机体免疫系统诱发局部或全身免疫反应，产生ASA[13-15]。肥胖可改变细胞免疫的功能状态[5]，引起内分泌和代谢紊乱，但如果没有引起女性生殖道损伤或粘膜损伤，可能并不增加女性对精子抗原的体液免疫反应。另一方面，本研究中的3组妇女，其平均年龄和不孕年限比较，差异并无统计学意义(P>0.05)；体重正常组检出了1例ASA-IgG阳性患者，2例ASA-IgG弱阳性患者；且3组间的ASA-IgG弱阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)，提示不论妇女肥胖与否，均存在被精子致敏的可能性[13]。因此，虽然本研究结果并未提示ASA产生与肥胖妇女不孕症相关，但因为样本量较少，结果可能存在一定偏倚，且体内低水平的ASA是否对女性生殖存在潜在干扰，尚需后期扩大样本量后深入探讨。

子宫颈是精子在女性生殖道中迁移的第一道选择性生理屏障，也是女性生殖道中局部精子免疫的主要活性部位。若子宫颈的局部免疫防御机制受到破坏或失平衡时，可以对外部抗原包括精子抗原失去中和及调理作用[16]。临床上一些不孕妇女的宫颈黏液中检出ASA，ASA可以抑制精子穿过宫颈黏液[17-18]。本研究中没有对3组不孕妇女获取宫颈黏液检测ASA，是出于以下考虑：(1)宫颈局部ASA检测需收集患者排卵期宫颈黏液标本，肥胖不孕妇女多数存在排卵障碍，短期内难以收集合适的标本用于检测；(2)虽然精子抗原刺激女性生殖道粘膜产生局部ASA与循环性ASA产生并不一致，但不孕女性外周血循环中ASA阳性率及滴度多高于宫颈粘液中的检测值，且更易于操作[19]。此外，本研究中超重及肥胖组妇女外周血ASA的检测结果均为阴性，故未再行3组不孕妇女宫颈黏液ASA水平的检测，所存在的不足亦有待于今后进一步完善实验设计加以探讨。

综上所述，本研究结果提示ASA不是介导肥胖不孕妇女生育力下降的主要因素，但个别正常体重和超重、肥胖的不孕妇女外周血标本中可检测出低水平的ASA。体内低水平的ASA是否对女性生殖存在潜在干扰，以及脂肪细胞的分泌和免疫功能状态与肥胖不孕妇女生育力的相互关系均有待于后期进一步研究探讨。